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1 材料和方法
1.1 實驗動物
健康雄性SD 大鼠,體重250～280 g,由徐州醫(yī)學院實驗動物中心提供。
1.2 藥物與試劑
參附注射液(主要成分為人參皂甙和烏頭堿,濃度分別為0.8 g/L和0.1 g/L,批號070703) 由雅安三九藥業(yè)有限公司提供。ATP購自Sigma公司，硫酸氰四丁胺(TBAHS)購自Aldrich公司，考馬斯亮藍G-250、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肌酸激酶(CK)檢測試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。其他試劑均為國產(chǎn)分析純。
1.3 實驗分組及步驟
大鼠戊巴比妥鈉(45 mg/kg) 腹腔注射麻醉,開胸取心,用冷灌流液沖掉殘留血液,并迅速移到Langendorff 灌流裝置上,灌流液為Krebs - Hanseleit 磷酸緩沖液,灌流壓為88 kPa。灌流前用95%氧氣和5%二氧化碳混合氣體向灌流液中平衡20 min。32只大鼠隨機分為4組,每組均為8 只。正常對照組(C組):大鼠心臟離體后接在灌流裝置上持續(xù)灌流110 min。單純?nèi)毖?復氧組(I/R組):大鼠心臟離體后接在灌流裝置上先預灌20 min,然后停止灌流,再恢復灌流60 min。參附注射液30 ml/L組和60 ml/L組(SF30 組，SF60 組):分別在再灌注后加入?yún)⒏阶⑸湟?其他處理同單純?nèi)毖?再灌注組。實驗時參附注射液溶解于灌流液中,稀釋的體積分數(shù)為3.0%和6.0%，即30 ml/L和60 ml/L。灌注結束時,取心臟左室心肌組織制成10%組織勻漿，用于心肌組織ATP含量、MDA活性和SOD含量等測定。
1.4 血流動力學指標測定
左心耳處剪一小口，將帶有小乳膠水囊的測壓管經(jīng)二尖瓣口插入左心室，連接壓力換能器，經(jīng)MP-100A-CE模數(shù)轉換器(BIOPAC System, Inc, USA)與計算機相連。調(diào)節(jié)左室舒張末壓為2～4 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)。Acqknowledge 4.0軟件實時采集和記錄左室舒張末壓(LVEDP)，并計算和顯示左室發(fā)展壓(LVDP)、左室內(nèi)壓上升/下降最大速率(±dp/dtmax)和心率(HR)等。用秒表計數(shù)每分鐘經(jīng)冠脈流出的液體量(冠脈流量，CF,ml/min)。
1.5 ATP測定的色譜條件
流動相為215 mmol/L KH2PO4、2.3 mmol/L TBAHS與3.5 %乙腈組成,pH為6.25。流速為0.9 ml/min。紫外檢測器,波長為210 nm。
1.6 心肌組織MDA活性和SOD含量的檢測
取10%心肌組織勻漿液，用硫代巴比妥法(TBA) 測定MDA 含量，用羥胺法測定SOD 活力。用考馬斯亮藍G-250 測定心肌組織蛋白質(zhì)的含量。操作步驟按試劑盒說明書進行。
1.7 冠脈流出液CK含量的檢測
再灌注60 min時收集冠脈流出液，用分光光度計測量流出液中CK的活性(按試劑盒說明書操作)。
1.8 統(tǒng)計學處理醫(yī)學 全在.線提供quanxiangyun.cn
所有數(shù)據(jù)均用Prism 3.0統(tǒng)計軟件進行處理,數(shù)據(jù)用±s表示。多組間比較應用單因素方差分析法進行分析,兩兩比較應用One-way ANOVA的Newman-Keuls法進行q檢驗。檢驗水準：α=0.05。
2 結 果
2.1 參附注射液對缺血/再灌注大鼠心臟血流動力學的影響
平衡灌注后(缺血前)，各血流動力學指標均無顯著性差異。用含有參附注射液的灌注液復灌后，SF30組的各血流動力學指標和恢復率與I/R組比較也無顯著性差異(P>0.05);而SF60組LVEDP、LVDP、+dp/dt和CF均有明顯改善(54±15，51±10，1035±240和11.8±2.3 vs. 72±11,35±8,720±206和8.8±1.9)，它們的恢復率與I/R組比較也存在顯著性差異(862±365,47±9,49±8和77.6±13 vs. 2400±390,33±7,36±9和59±11)(P<0.05);SF60組HR的恢復率雖有改善趨勢，但無顯著性(P>0.05)。
2.2 參附注射液對缺血/再灌注大鼠心肌SOD活性和MDA生成以及冠脈流出液CK含量的影響
與正常對照組比較，缺血/再灌注使各組心肌SOD活性下降，MDA含量升高，冠脈流出液CK含量增加。與I/R組比較，SF30組的SOD活性、MDA和CK含量無顯著差異(P>0.05);SF60組SOD活性顯著升高，MDA和CK含量顯著下降(P<0.05)(表1)。
2.3 參附注射液對缺血/再灌注大鼠心肌ATP含量的影響
如表2所示，平衡灌注后(缺血前)，各組心肌ATP含量無顯著性差異。缺血/再灌注后，I/R組心肌ATP含量明顯低下。與I/R組比較SF30組的心肌ATP含量有所升高，但無顯著性差異(P>0.05);SF60組心肌ATP含量則明顯升高(P<0.05)。表1 各組大鼠心肌MDA、SOD和冠脈流出液CK活性
的變化(略)表2 參附注射液對缺血/再灌注大鼠心肌ATP含量
