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MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)粉防己堿的濃度在10μmol/L以上時(shí)，對(duì)HeLa細(xì)胞的生長(zhǎng)具有抑制作用，且隨著濃度和時(shí)間的增加，抑制率逐漸增高，具有時(shí)間、濃度依賴性。隨著濃度的增加，作用24h后，抑制率增加明顯，24h IC50為17μmol/L。而作用48h后，各濃度抑制率均達(dá)60%以上。至作用72h，各濃度抑制率已達(dá)90%以上(P<0.05，圖1)。
2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)粉防己堿誘導(dǎo)各組細(xì)胞的凋亡情況
結(jié)果顯示，用0μmol/L、15μmol/L粉防己堿處理細(xì)胞24h后，處理組細(xì)胞凋亡率為(51.8±0.97)%，明顯高于對(duì)照組凋亡率[(24.3±1.23)%](P<0.05，圖2)。
2.3 AnnexinV/PI雙染法激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化
未加粉防己堿的空白對(duì)照組細(xì)胞AnnexinV和PI均為低染;處理組(15μmol/L)作用24h后出現(xiàn)AnnexinV和PI多為高染的中、晚期凋亡細(xì)胞。說(shuō)明粉防己堿對(duì)HeLa細(xì)胞具有誘導(dǎo)其凋亡的作用。與流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果基本一致(圖3)。
3 討 論
宮頸癌是世界范圍內(nèi)女性第二大惡性腫瘤，占所有腫瘤的10%。傳統(tǒng)的宮頸癌治療模式與分期密切相關(guān)，Ⅰ期、ⅡA期以手術(shù)為主，輔以放療，ⅡB期以上以放療為主，輔以手術(shù)和化療。近年來(lái),隨著腫瘤化學(xué)治療的基礎(chǔ)與臨床研究的迅速發(fā)展，化療藥物的不斷開(kāi)發(fā)及給藥途徑和方法的改進(jìn)，以順鉑(DDP)為核心的聯(lián)合化療及放化療在宮頸癌治療中取得了一定療效，然而化療與放療均有嚴(yán)重的副作用。因此，尋找副作用小同時(shí)對(duì)腫瘤又有較好的抑制作用的藥物成為目前研究的一個(gè)熱點(diǎn)。
許多研究證明，粉防己堿在腫瘤細(xì)胞和動(dòng)物模型中都具有抗癌作用。其用于腫瘤治療主要包括以下幾方面：①直接抗腫瘤作用。通過(guò)激活凋亡相關(guān)基因，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡或通過(guò)影響細(xì)胞周期進(jìn)程，發(fā)揮直接抗腫瘤作用。大量研究證明，粉防己堿可以使許多細(xì)胞如U937、HL60、A549、HepG2和T細(xì)胞發(fā)生G1期阻滯和凋亡，從而抑制人肝細(xì)胞癌，乳腺癌及食管癌，結(jié)腸癌，卵巢癌等腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)[9-11]。②放療增敏作用。通過(guò)抑制放射線引起的潛在致死性損傷的修復(fù)，及誘導(dǎo)凋亡的作用，實(shí)現(xiàn)放療增敏的作用[15]。③減毒作用。研究表明粉防己堿可通過(guò)增高人體內(nèi)SOD活性降低脂質(zhì)過(guò)氧化物水平，減輕阿霉素引起的心肌損害[16]，或通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)而起到減輕毒性反應(yīng)的作用[17]。④逆轉(zhuǎn)耐藥性。通過(guò)作用于P-糖蛋白(P-gP)，使其外排泵功能失活從而提高細(xì)胞內(nèi)藥物濃度[18]，或通過(guò)下調(diào)多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)，逆轉(zhuǎn)多藥耐藥(MDR)等機(jī)制抗腫瘤。
