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臨床醫(yī)學(xué)論文凋亡素參與正常細胞核蛋白表達差異
1．引言
凋亡素能夠特異引起腫瘤細胞與轉(zhuǎn)化細胞的凋亡，這種細胞凋亡是非P53 依賴的，而不能夠?qū)е抡＜毎牡蛲�，這與凋亡素的核定位有關(guān)。凋亡素是一種在細胞質(zhì)與細胞核之間穿梭的蛋白。無論是在腫瘤細胞還是正常細胞內(nèi)，凋亡素都能夠通過核定位信號進入細胞核。然而在腫瘤細胞中，凋亡素被修飾，導(dǎo)致出核信號的失活，定位在細胞核內(nèi)，引起腫瘤細胞的凋亡；而在正常細胞中，凋亡素又通過出核信號出核，定位在細胞漿內(nèi)，不引起正常細胞的凋亡。
綜上所述，腫瘤細胞與正常細胞之間的蛋白表達一定存在著某種差異，使得凋亡素在腫瘤細胞中被特異地修飾。本實驗通過蛋白質(zhì)組學(xué)的方法來尋找腫瘤細胞與正常細胞核內(nèi)的蛋白表達差異，以期望能夠進一步探討凋亡素誘導(dǎo)腫瘤細胞特異凋亡的機制。
2．材料和方法
2.1 實驗材料PureyieldTM Plasmid Midiprep System(Promega)、RPMI1640 細胞培養(yǎng)基、新生牛血清（GIBCO)、轉(zhuǎn)染試劑LIPOFECTAMINE 2000(Invitrogen)、蛋白酶抑制劑（sigma)、pEGFP-C1、pEGFP-C1-apoptin 由倫敦大學(xué)醫(yī)學(xué)院Tavassoli 博士惠贈，JM109 菌株由本室保存，HepG2 細胞、L02 細胞由本校遺傳教研室饋贈。
2.2 pEGFP-C1-apoptin 載體的提取按照 Promega 公司PureyieldTM Plasmid Midiprep System 提取試劑盒進行質(zhì)粒的提取。
2.3 細胞培養(yǎng)用含 RPMI1640、10%新生牛血清的培養(yǎng)液，置37℃、5%CO2 及飽和濕度的恒溫箱中培養(yǎng)HepG2 細胞、L02 細胞，每2d 傳代一次。
2.4 細胞轉(zhuǎn)染進行 24 孔板貼壁細胞的瞬時轉(zhuǎn)染，將pEGFP-C1-apoptin 質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染進HepG2 和L02兩種細胞。
2.5 激光共聚焦檢測apoptin 定位轉(zhuǎn)染后24、 48h 將 24 孔細胞培養(yǎng)板取出,在各組細胞的培養(yǎng)基中加入 Hoechst 33342染液(終濃度為 10μ g/ml), 37℃恒溫避光染色 15min, PBS 洗3 次,去除未結(jié)合的 Hoechst33342, 激光共聚焦熒光顯微鏡下觀察,拍照。
