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中藥學論文不同濃度地塞米松對腭胚突間充質(zhì)細胞作用規(guī)律
腭裂動物模型是研究先天性腭裂發(fā)病機理的主要手段。通常采用將致畸劑注入正常孕鼠母體內(nèi)誘導胎鼠產(chǎn)生腭裂，建立腭裂動物模型。本課題組從上世紀90 年代即開始通過對地塞米松誘導的腭裂動物模型進行發(fā)病機理的系列研究。以往的研究主要采用孕鼠腹腔注射地塞米松的方式進行胎鼠畸形的誘導和組織切片觀察。為了進一步闡明地塞米松誘導腭裂畸形的具體生物學機制，在細胞水平上進行研究已成為必然。然而，要在細胞水平研究地塞米松的作用機理，需要找到一個適宜的濃度，既能發(fā)揮地塞米松的致畸作用，又不能產(chǎn)生過強的毒性而導致細胞大量壞死，以保證實驗順利進行。本研究旨在觀測不同濃度地塞米松對EPM 細胞生長的作用規(guī)律，選擇出適宜的地塞米松濃度，為在細胞水平研究地塞米松的致畸作用機理奠定實驗基礎。
1 材料和方法
1.1 材料DMEM/F12（1：1)細胞培養(yǎng)基（Hyclone，美國)；DispaseII 酶（Sigma，美國)；胰蛋白酶；青霉素；鏈霉素；乙二胺四乙酸（EDTA)（Sigma，美國)；胎牛血清（Fetal bovineserum FBS)（Hyclone，美國)；地塞米松（dexamethasone，Dex)（Solarbio)；3-（4，5- 二甲基噻唑-2 ) -2 ，5- 二苯基四氮唑溴鹽（3－（4 ， 5dimethythiazol-2-yl ) -2 ，5-diphenyterazolium Pomide，MTT)（Sigma，美國)、二甲基亞砜（Dimethylsulphoxide，DMSO)（Sigma，美國)；碘化丙啶（Propidium lodide，PI)（Sigma，美國)。倒置相差顯微鏡（Olympus LX50，日本)；二氧化碳恒溫孵箱（SANYO MCO-17AI，日本)；酶聯(lián)免疫檢測儀（Microplate Reader Model 550，Bio-Rad，美國)；體視顯微鏡（OLYMPUS，日本)。
1.2 小鼠腭胚突間充質(zhì)細胞的體外培養(yǎng)與觀察將 GD12.5 天的C57BL/6J 小鼠斷頸處死，無菌條件下取出胚胎，按照肖[3]的方法獲取腭胚突間充質(zhì)單細胞懸液。以5×105 個/瓶接種到75ml 培養(yǎng)瓶中，以及2×104 個/ml 密度接種于6 孔板中蓋玻片上。將培養(yǎng)瓶移至二氧化碳恒溫孵箱培養(yǎng)。待EPM 細胞鋪滿蓋玻片的80%左右時，進行HE 染色以及采用SP 法免疫組織化學染色，運用Vimentin， CK 單克隆抗體鑒定EPM 細胞特異性抗原表達。脫水，透明，封片，顯微鏡下觀察結(jié)果。
