臨床免疫學(xué)及檢驗(yàn)授課教案-理論課教案:金免疫技術(shù)

教案

授課內(nèi)容(章，節(jié))

題 目

第二十二章 金免疫技術(shù)

授課教師單位

檢驗(yàn)系

教研室

臨床免疫

職稱

主管技師

授課方式

大班

授課時(shí)數(shù)

2學(xué)時(shí)

授課對(duì)象     年級(jí)(系)  班

授課時(shí)間

2006  年 月   日

授課地點(diǎn)

12-2A

采用教材版本

中國(guó)醫(yī)藥科技出版社

教學(xué)目的與要求：

1、掌握膠體金的特性

2、熟悉膠體金及免疫金的制備

3、掌握金免疫測(cè)定技術(shù)的分類及各種試驗(yàn)的原理，熟悉金免疫測(cè)定技術(shù)的臨床應(yīng)用及評(píng)價(jià)

4、熟悉免疫金(銀)光鏡染色技術(shù)的原理

5、了解金免疫組織化學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用與評(píng)價(jià)

授課內(nèi)容(要點(diǎn))

時(shí)間

分配

1、  復(fù)習(xí)免疫技術(shù)、標(biāo)記免疫技術(shù)的概念、特點(diǎn)

2、  簡(jiǎn)述金免疫技術(shù)的發(fā)展史、分類及應(yīng)用

3、  重點(diǎn)講述膠體金的特性(膠體性質(zhì)、光吸收性、呈色性)

4、  講述膠體金的制備：原理、最常用的制備方法、操作要點(diǎn)、制備過(guò)程中的注意事項(xiàng)

5、  講述膠體金的鑒定和保存

6、  簡(jiǎn)述免疫金的特性及制備原理

7、  免疫金的制備要點(diǎn)

8、  金免疫測(cè)定技術(shù)的基本原理，特點(diǎn)及分類

9、  斑點(diǎn)免疫滲濾試驗(yàn)的基本試劑組成

10、  斑點(diǎn)免疫滲濾試驗(yàn)的基本原理，操作示意

11、  重點(diǎn)講述斑點(diǎn)免疫滲濾試驗(yàn)的技術(shù)類型：原理、質(zhì)控

12、  斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)的試劑組成、基本原理

13、  重點(diǎn)講述金免疫層析試驗(yàn)的分類、原理

14、  斑點(diǎn)免疫滲濾試驗(yàn)與金免疫層析試驗(yàn)的異同點(diǎn)總結(jié)

15、  簡(jiǎn)述金標(biāo)法的優(yōu)勢(shì)、劣勢(shì)

16、  簡(jiǎn)述免疫金(銀)染色法的原理

17、  簡(jiǎn)述金免疫組織化學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用

18、  總結(jié)

5分鐘

5分鐘

10分鐘

5分鐘

3分鐘

4分鐘

3分鐘

3分鐘

2分鐘

2分鐘

9分鐘

5分鐘

15分鐘

1.5分鐘

3分鐘

1.5分鐘

1.5分鐘

1.5分鐘

講課重點(diǎn)和難點(diǎn)（采用何種方式或方法來(lái)解決)

1、  膠體金的特性：動(dòng)畫(huà)示意膠體金的膠體性質(zhì)，圖表顯示膠體金的吸收性(膠體金的光吸收峰波長(zhǎng)隨顆粒的大小而變化)，顏色顯示膠體金的呈色性(不同大小的膠體金呈現(xiàn)不同的顏色)

2、  免疫金制備要點(diǎn)：動(dòng)畫(huà)示意如何進(jìn)行蛋白質(zhì)最適標(biāo)記量的確定

3、  斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)的原理：動(dòng)畫(huà)圖示雙抗體夾心法及間接法的原理，并舉例說(shuō)明

4、  斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)的質(zhì)控：動(dòng)畫(huà)圖示雙抗體夾心法及間接法的質(zhì)控方式，判斷方式

5、  斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)的原理：動(dòng)畫(huà)圖示雙抗體夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法及間接法的原理，并舉例說(shuō)明

教學(xué)過(guò)程設(shè)計(jì)：（授課中對(duì)以下內(nèi)容采取的措施)

1．加強(qiáng)基礎(chǔ)與臨床的聯(lián)系：

A、臨床上主要用到的金顆粒直徑為5-20nm，呈紅色；2-5nm主要用于組化技術(shù)

B、金免疫技術(shù)中的金免疫測(cè)定技術(shù)與臨床關(guān)系較為密切，臨床中的許多急診項(xiàng)目，如HCG、HbsAg、HIV抗體等的檢測(cè)都是采用金免疫測(cè)定技術(shù)進(jìn)行測(cè)定

C、講述斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)及斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)時(shí)，舉例說(shuō)明，斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)檢測(cè)抗dsDNA抗體，斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)檢測(cè)HbsAg、HCG。

D、講述金標(biāo)法的優(yōu)勢(shì)及劣勢(shì)時(shí)，重點(diǎn)突出“金標(biāo)法“為何有“床邊檢驗(yàn)”之稱，金標(biāo)法在臨床中的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)，在臨床中已開(kāi)展的項(xiàng)目。

2．啟發(fā)引導(dǎo)學(xué)生思維：

A、講解金免疫技術(shù)前，先引導(dǎo)學(xué)生復(fù)習(xí)免疫技術(shù)及標(biāo)記免疫技術(shù)的概念、特點(diǎn)，和前面的章節(jié)進(jìn)行比較，使同學(xué)對(duì)本章節(jié)的內(nèi)容有一個(gè)大概的認(rèn)識(shí)

B、講述斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)及斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)的各個(gè)類型原理時(shí)，引導(dǎo)學(xué)生依據(jù)檢測(cè)的對(duì)象不同，該選用什么檢測(cè)方法，推測(cè)檢測(cè)方法該如何建立，試劑條每個(gè)部分包被的成分是什么，整個(gè)反應(yīng)的流程及原理是怎樣的。

3．采用英語(yǔ)專業(yè)詞匯：

金免疫技術(shù)(colloidal gold immunoassay)

膠體金(colloidal gold)

免疫金(immunogold)

斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)（ dot immunogold filtration assay,DIGFA )

斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn) （ dot immunogold chromatographic assay,DICA )

4．指導(dǎo)學(xué)生自學(xué)：

金標(biāo)技術(shù)的應(yīng)用非常廣泛，已應(yīng)用于臨床的很多領(lǐng)域。由于目前它還是定性分析，故主要用以檢測(cè)正常體認(rèn)中不存在的生物活性物質(zhì)（如傳染病的抗原及抗體)，以及正常情況下體液中含量很低而在某些疾病中升高的生物活性物質(zhì)。隨著技術(shù)的進(jìn)展，對(duì)某些可確定診斷的、有正常上限值（cutoff)的生物活性物質(zhì)也可進(jìn)行檢測(cè)。學(xué)生可以上網(wǎng)查找金標(biāo)技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用的相關(guān)資料。

5．學(xué)科進(jìn)展內(nèi)容：

1978年，Geobegan等將膠體金標(biāo)記抗體用于普通光鏡下檢測(cè)B淋巴細(xì)腦表面膜免疫球蛋白，建立了光鏡水平的免疫金染色(Immunogold staining，IGS)。1981年Danscher用銀顯影方法增強(qiáng)金顆粒的可見(jiàn)度，并提高了靈敏度。1983年，Holgate等又加以改進(jìn)，將免疫金染色與銀顯影技術(shù)相結(jié)合，稱為免疫金銀染色法(Immunogold silver staining，IGSS)。由于IGS和IGSS兩種方法具有試劑制備簡(jiǎn)便，特異性強(qiáng)，靈敏度高，應(yīng)用范圍廣，并可用于雙重和多重標(biāo)記等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究領(lǐng)域，是目前免疫組織化學(xué)技術(shù)中較常用的敏感方法之一。近年來(lái)，膠體金標(biāo)記技術(shù)進(jìn)一步發(fā)展應(yīng)用于免疫轉(zhuǎn)印、流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)、液相免疫測(cè)定、固相斑點(diǎn)金／銀染色(dot IGS／IGSS)及斑點(diǎn)金免疫滲濾測(cè)定法(dot immunogold filtration assay，DIGFA)等多種標(biāo)記免疫檢測(cè)方法。

課堂提問(wèn)設(shè)計(jì)：

1、  什么是免疫技術(shù)，什么是標(biāo)記免疫技術(shù)？

2、  斑點(diǎn)免疫滲濾試驗(yàn)中的質(zhì)控點(diǎn)如何設(shè)計(jì)？包被的是什么成分？

3、G區(qū)如果包被的是鼠源性的金標(biāo)特異性抗體，則C區(qū)包被的是什么物質(zhì)？醫(yī)學(xué)招聘網(wǎng)

教師與學(xué)生互動(dòng)的設(shè)計(jì)：

  請(qǐng)解各種反應(yīng)類型的原理時(shí)，舉例說(shuō)明，引導(dǎo)學(xué)生依據(jù)檢測(cè)對(duì)象的種類不同、反應(yīng)類型的不同、試劑的不同來(lái)推理試驗(yàn)的原理。

教學(xué)方法與手段（采用何種直觀教具和數(shù)量)(請(qǐng)打√)

板書(shū)設(shè)計(jì)√

掛圖 投影 √   幻燈 錄像 CAI課件√ 模型

其它：

課時(shí)具體安排：

大課講授，共2學(xué)時(shí)，80分鐘

教學(xué)改革措施（授課形式、課堂提問(wèn)、思考題、復(fù)習(xí)提綱、測(cè)試題)

1、充分多媒體的優(yōu)勢(shì)，以動(dòng)畫(huà)的形式將膠體金的特性、各種試驗(yàn)的反應(yīng)原理形象地表現(xiàn)出來(lái)，學(xué)生易于理解

2、密切聯(lián)系臨床，將臨床上常用的檢測(cè)項(xiàng)目融合到課堂講授中，如斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)檢測(cè)HbsAg，斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)檢測(cè)抗dSDNA

3、啟發(fā)性教學(xué)，適當(dāng)?shù)靥釂?wèn)，引導(dǎo)學(xué)生推理檢測(cè)的原理，加深印象

4、總結(jié)復(fù)習(xí)，開(kāi)課前先與同學(xué)復(fù)習(xí)相關(guān)知識(shí)，使同學(xué)了解本章節(jié)與前幾堂課的異同點(diǎn)，便于同學(xué)歸納知識(shí)點(diǎn)。課堂結(jié)束前，將本章節(jié)的重點(diǎn)內(nèi)容再次強(qiáng)調(diào)，例如膠體金的特性，金免疫測(cè)定技術(shù)的分類等。

輔導(dǎo)的問(wèn)題與難點(diǎn)：

  斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)間接法的原理：先動(dòng)畫(huà)圖示操作的流程，再動(dòng)畫(huà)圖示反應(yīng)原理、結(jié)果的判斷，采用反流免疫層析法的作用。

備課主要參考資料（圖書(shū)、文獻(xiàn))：

1、免疫膠體金的制備及其在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用，周友泉

2、膠體金快速斑點(diǎn)結(jié)合免疫分析，劉宏偉 

3、免疫學(xué)和免疫學(xué)檢驗(yàn)，陶義訓(xùn)

授課教師對(duì)此次授課的自我評(píng)價(jià)：

教學(xué)內(nèi)容充實(shí)，時(shí)間安排合理，多媒體課件制備精美，理論結(jié)合實(shí)際，重點(diǎn)突出。

教學(xué)后記（隨筆)：

隨著免疫分析日益廣泛應(yīng)用于以臨床為主以及非臨床領(lǐng)域的診斷工業(yè)（diagnostic industry)，免疫分析向兩個(gè)方向發(fā)展：一類為全自動(dòng)化的免疫分析；另一類為以硝酸纖維膜為載體的快速免疫分析。前者需要價(jià)格昂貴的全自動(dòng)quanxiangyun.cn/zhuyuan/儀器及與儀器嚴(yán)格配套的各種試劑盒，目前只能在醫(yī)療及檢測(cè)中心應(yīng)用，雖也能較快速給出結(jié)果，但仍需一定時(shí)間，不適合遠(yuǎn)離醫(yī)療及檢測(cè)中心的地區(qū)，更不能用于“患者床旁檢驗(yàn)”（real time clinical decision)和普查的需要，在酶免疫分析的基礎(chǔ)上，主要以硝酸纖維素膜為載體的快速診斷方法迅速和廣泛地發(fā)展起來(lái)，即快速斑點(diǎn)免疫結(jié)合分析（dot immunobinding assay, DIBA)。通過(guò)本章的學(xué)習(xí)，學(xué)生了解了金免疫技術(shù)的發(fā)展歷史，掌握了膠體金的特性、膠體金和免疫金的制備要點(diǎn)，掌握了各種金免疫測(cè)定技術(shù)的原理，了解了金免疫技術(shù)的優(yōu)勢(shì)及其在臨床中的應(yīng)用。

學(xué)生評(píng)價(jià)：

教學(xué)內(nèi)容充實(shí)，重點(diǎn)突出，密切聯(lián)系臨床實(shí)際

教研室主任評(píng)價(jià)：

教學(xué)內(nèi)容充實(shí)，邏輯結(jié)構(gòu)安排合理。教學(xué)深度適中，時(shí)間安排合理，理論板書(shū)和臨床實(shí)例結(jié)合恰當(dāng)，重點(diǎn)、難點(diǎn)突出，學(xué)生易掌握，達(dá)到了預(yù)期效果。

教案書(shū)寫(xiě)要求：文字通暢，書(shū)寫(xiě)工整或電腦打印。