生理學實驗指導-第二篇:第十章

第十章  泌尿系統(tǒng)

第一節(jié)  尿液生成的影響因素及藥物

   ［實驗目的］

觀察某些因素對尿生成的影響，并分析其作用機制。

   ［實驗動物］

家兔，性別不拘。

   ［藥品、器材］

1．器材

哺乳類手術器械、繩、線、紗布、動脈插管，生物信號采集處理儀、兔臺、電剌激器、保護電極，培養(yǎng)皿、500ml燒杯、輸液瓶、可控輸液管和頭皮針、膀胱插管、1ml、5ml、10ml、20ml、50ml注射器，酒精燈、溫度計、火柴、三角支架、長柄木試管夾、血糖計、計時鐘、10ml刻度試管和50ml量筒。

2.藥品

 3%戊巴比妥鈉125單位/ml肝素生理鹽水、生理鹽水、20%葡萄糖溶液,1：10 000去甲腎上腺素、垂體后葉素(含ADH)、速尿、班氏試劑(或尿糖試紙)。

[觀察指示]

血壓、血糖、尿糖、尿量。

   ［方法、步驟］

1．3%戊巴比妥鈉30mg/kg體重，經(jīng)耳緣靜脈注射，麻醉后，背位固定于兔臺上。

2．將輸液針管內(nèi)氣泡排凈，并經(jīng)耳緣靜脈輸生理鹽水溶液的基礎液，固定輸液速度(不超過每分鐘10滴)，用止血鉗或動脈夾固定頭皮針，以防滑脫。

3．行左頸總動脈插管術  方法參見第五章第五節(jié)。用生物信號采集處理儀記錄血壓。分離、標記頸右側(cè)迷走神經(jīng)。

4．行膀胱插管術，從恥骨聯(lián)合向上沿正中線作4～5cm長的切口，沿腹白線打開腹腔，將膀胱輕輕拉出腹外，于雙側(cè)輸尿管(靠近膀胱處)下方穿一線，輕輕將膀胱向上翻起，將線繞向下方結扎，以防尿液從尿道口流出；用兩個止血鉗對稱提起膀胱頂部的無血管區(qū)，在兩鉗之間的膀胱頂部無血管處剪一小切口，切口大小以剛插入插管為宜，在確認插管經(jīng)切口已通向膀胱腔內(nèi)時，再插入插管約0.5cm深，然后將切口旁的膀胱壁和插管一同用雙粗線扎緊，用線固定在插管側(cè)鉤上。

    5.觀察、記錄實驗結果

(1)記錄術后尿量(ml/min)、血壓(mmHg)，以作為下一項目的對照。

(2)  快速靜脈注射37℃生理鹽水20ml后，分別記錄血壓和第1、第2、第3分鐘內(nèi)的尿量。

(3)  以適宜強度、16HZ的脈沖電流剌激右迷走神經(jīng)使血壓下降至50mmHg時，并持續(xù)15秒鐘，注意在血壓剛下降時立即記錄血壓和第一分種內(nèi)尿量。

(4)  在做此項前可加測血糖濃度(mg/dl)和做尿糖定性實驗，靜脈quanxiangyun.cn/Article/注射20%葡萄糧溶液5ml后，分別記錄血壓、血糖濃度第1，第2，第3分鐘的尿量。并可做尿糖定性實驗。

(5)  靜脈注射1：10000去甲腎上腺素0.5ml后，記錄血壓和有血壓升高時的尿量變化。

(6)  靜脈注射速尿(5mg/kg體重)后，分別記錄血壓和第1、第2、第3、第4、第5和第6分鐘內(nèi)尿量。

(7)  靜脈注射垂體后葉素2單位后，立即記錄血壓和第1分鐘內(nèi)的尿量。

(8)  經(jīng)股動脈快速放血使動脈血壓降至50mmHg時，立即止血并記錄尿量變化，然后快速靜脈輸液使血壓回升并記錄血壓和尿量變化。

附：尿糖定性試驗：

①試管內(nèi)加班氏試劑1ml，再加尿液2滴，在酒精燈上加熱至煮沸，冷卻觀察試液及沉淀物，如試液由藍色轉(zhuǎn)為黃色或粉紅色，表示尿糖試驗陽性。

②也可用尿糖試紙做本實驗。

實驗完畢后將每個項目中的血壓和尿量的實驗結果填入表1-1中，并分析其機制。

表10-1  某些因素對兔尿生成的影響

［注意事項］

    (1)  膀胱插管過程中，動作應輕柔，以免膀胱充血、出血。

(2)  經(jīng)靜脈給藥前，針管內(nèi)的空氣務必排干凈。

(3)  每個觀察項目均應有對照。

   ［思考題］

常見的影響尿生成的因素有哪些?機制是什么?

第二節(jié)  急性中毒性腎功能不全

   ［實驗目的］

(1)  復制中毒性腎功能不全的動物模型

(2)  觀察升汞中毒家兔的一般狀況，腎功能的變化以及腎臟的形態(tài)改變。

   ［實驗動物］

家兔，性別不拘。

   ［藥品、器材］

1%HgCl��2溶液，0.9%NaCl溶液，25%葡萄糖溶液，1%普魯卡因溶液，標準尿素氮溶液��(0.025mg/ml)��，尿素標準應用液Ⅱ，二乙酰一肟一氨硫脲(DAM-TSC)液，酸混合液，5%醋酸溶液，蒸鎦水。

兔手術器械一套，離心機、光電比色計、水浴鍋、微量移液器，10ml試管、試管架、試管夾、酒精燈、塑料插管、膀胱插管，吸管、滴管、燒杯、培養(yǎng)皿、洗耳球，2ml、5ml、50ml注射器。

   ［觀察指標］

(1)動物一般狀況  (2)尿量  (3)尿蛋白  (4)血清尿素氮  (5)腎臟形態(tài)

   ［方法、步驟］

(1)家兔三只，一只為汞中毒兔，第二只為汞中毒加治療兔，第三只為正常對照兔，汞中毒兔于實驗前24小時稱重，1%HgCl��2肌肉注射(1毫升/公斤體重)，復制急性中毒性腎功能不全模型備用，對照兔則肌肉注射等量生理鹽水。

(2)將家兔背位固定于兔手術臺上，頸部剪毛，局麻，常規(guī)頸部手術，分離一側(cè)頸總動脈并插管，取血5毫升作血清尿素氮測定。

(3)下腹部剪毛，局麻，暴露膀胱，(見第一節(jié))用5ml注射器從膀胱內(nèi)抽取尿液5ml置于試管內(nèi)，做尿蛋白定性試驗。

(4)行膀胱插管術(見第一節(jié))，收集尿液測定尿量。

(5)經(jīng)耳緣靜脈快速注射37℃生理鹽水(10ml/kg)，同時靜脈注射速尿(5mg/kg)，分別記錄注射后5、10、20、30分鐘尿量。

(6)上述操作完畢后，靜脈注射空氣處死動物，打開腹腔，取出腎臟，觀察腎臟外觀及切面形態(tài)學改變。

尿蛋白定性檢查：取正常及中毒兔尿液各3ml分別放入試管中，以試管夾夾住試管，在酒清燈上加熱至沸騰(試管口不要對著人，小心加熱，切勿讓試管內(nèi)尿液溢出)。若有混濁，加入5%醋酸��3～5��滴，再煮沸，若尿變清，是尿內(nèi)無機鹽所致，若混濁加重，則表示尿中含有蛋白，根據(jù)混濁程度可按下面標準判定結果。

“一”表示尿液清晰不顯混濁。

“+”表示尿液出現(xiàn)輕度白色混濁(含蛋白質(zhì)0.01～0.05克%)。

“++”表示尿液稀薄乳樣混濁(含蛋白質(zhì)0.05～0.2克%)。

“+++”表示尿液乳濁或有少量絮片存在(含蛋白質(zhì)0.2～0.5克%)。

“++++”表示尿液出現(xiàn)絮狀混濁(含蛋白質(zhì)＞0.5克%)。

8.血清尿素氮測定

(1)原理：血中尿素在強酸條件下與二乙酰脲(Diacotylmonoxim)和氨硫住院醫(yī)師脲��(Thio-Semi-carbazixe)一起煮沸，生成紅色復合物，其顏色深淺與尿素氮含量成正比關系。

(2)從正常及中毒家兔頸總動脈取血5ml，離心5分鐘(2000轉(zhuǎn)/分)。分離血清，用滴管將血清吸出，分別移入干燥小試管中備用。

(3) 尿素氮操作方法

  表10-2操作方法：

(測定管A為正常家兔血清，測定管B為中毒家兔血清)。

混勻后，置沸水鍋中準確煮沸10分鐘，置流水中冷卻3分鐘后比色，用520nm波長綠色濾光板比色，以空白管調(diào)零。

(4)計算：

測定管光密度(Du)  100 Du

標準管光密度(Ds)×0.002×0.02=Ds×10=血清尿素氮(毫克%)

   ［注意事項］

(1)加血清、標準液等試劑量應準確。

(2)加入試劑Ⅱ之后，不超過1～2分鐘，即應放入沸水中水浴。

(3)煮沸及冷卻時間應準確，否則顏色反應消退。

9．試劑的配制：

(1)二乙�！�肟氨硫脲液：

稱取二乙酰—肟600毫克，氨硫脲30毫克，蒸餾水溶解并加至100毫升。

(2)酸混合液：

濃磷酸(85～87%)35ml，濃硫酸80毫升，慢慢滴加于800毫升水中，冷卻后加水至1000毫升。

(3)尿素氮標準貯存液(1毫克氮/毫升)

稱取分析純尿素2.143克，加0.01當量硫酸溶解，并加至1000毫升，置冰箱內(nèi)保存。

(4)尿素標準應用液Ⅰ(0.025毫克氮/毫升)。

吸取尿素氮標準貯存液2.5毫升，加0.01當量硫酸至100毫升。

(5)尿素氮標準應用液Ⅱ(0.005毫克氮/毫升)。

吸取尿素氮標準應用液Ⅰ120毫升，加0.01當量硫酸至100毫升。

   ［思考題］

根據(jù)實驗結果闡述急性中毒性腎病的機能代謝變化及其機制。

第三節(jié)  腎臟功能狀態(tài)對藥物效應的影響

   ［實驗目的］

觀察腎臟功能損害對藥物效應的影響。

   ［實驗動物］

小鼠4只

   ［藥品、器材］

0.04％氯化汞溶液、2.5％硫酸鏈霉素溶液、普通天平、注射器、鼠籠、針頭與苦味酸等

   ［觀察指標］

小鼠呼吸及肌肉活動情況，最后結果。

   ［方法、步驟］

(1)將小鼠編號并稱重。

(2)在實驗前24h先取小鼠2只，腹腔注射0.04％氯化汞溶液0.2m1／10 g體重，以破壞腎功能。

(3)實驗當天取注射過氯化汞的小鼠和正常小鼠各2只，稱重后分別由腹腔注射2.5％硫酸鏈霉素0.15ml／10 g體重（375mg/kg體重)，觀察小鼠的活動情況，比較注射過氯化汞的小鼠與正常小鼠的最后結果有何不同。

將實驗結果填入表10-3中。

 表10-3 不同腎臟功能狀態(tài)對鏈霉素效應的影響

   ［思考題］

各鼠的最后實驗結果有哪些不同?試對兩組小鼠對藥物反應不同的原因作簡要的分析和討論。