�。�4)頭發(fā)
�、侔蜗骂^發(fā)，剪下頭發(fā)近端0.5cm段；
�、谥萌�0.4ml溶液2中（1.5ml管)；
�、郯闯绦駻5～7步進(jìn)行，用50μl體系作PCR。
（5)血細(xì)胞RNA用焦碳酸二乙酯（DEP)抑制RNase,NP-40溶胞但不溶核。
①用聚蔗糖-泛影葡胺或其它方法分離單核細(xì)胞；
�、谥�2ml離心管中，加PBS至細(xì)胞中，500×g離心5min；
�、叟渲疲―EP)溶液用無水乙醇將DEP作9+1稀釋，再用NP-400.5%作1：999稀釋（抑制RNase)；
�、芗�(xì)胞沉淀中加200～400μl此溶液，旋渦混合；
�、�13000×g離心10s；
�、奚锨遛D(zhuǎn)移至新管中，37℃保溫20min，90℃，10min；
�、唠x心，上清轉(zhuǎn)移至新管。取5～10μl作反轉(zhuǎn)錄；
�、嗳绻崔D(zhuǎn)錄失敗，可能因DEP殘留，可將樣品再在90℃加熱5min，再做試驗(yàn)；
⑨本法也可用于培養(yǎng)細(xì)胞。
二、注意事項(xiàng)
PCR只需幾個(gè)DNA分子作模板就可大量擴(kuò)增，應(yīng)注意防止反應(yīng)體系被痕量DNA模板污染和交叉污染，這是造成假陽性最大的可能。下例可形象說明污染的嚴(yán)重性。
典型的PCR反應(yīng)可在100μl反應(yīng)液中擴(kuò)增1012個(gè)DNA，此液傾入50nm×25m×2m的游泳池中，充分混合取0.1ml池水,其中含有40個(gè)分子的DNA,用PCR擴(kuò)增即已可呈陽性，這一點(diǎn)對(duì)檢測(cè)HIV更為重要。常規(guī)只要15個(gè)拷貝的核酸即可查出。假陽性結(jié)果往往來自痕量污染和交叉污染，尤其在待擴(kuò)增靶序列濃度低的情況下，更有必要采取防備措施。
（1)DNA處理最好用硅烷化塑料管以防粘附在管壁上，所有緩沖液吸頭、離心管等用前必須高壓處理，常規(guī)消耗用品用后作一次性處理，避免反復(fù)使用造成污染。
(2)PCR在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，操作前后紫外燈消毒。
超凈臺(tái)內(nèi)設(shè)內(nèi)供PCR用微量離心機(jī)、一次性手套、整套移液器和其它必須品；移液品用一次性吸頭和活塞的正向排液器，防止移液器基部污染。
�。�3)PCR操作應(yīng)戴手套并勤于更換。
�。�4)成套試劑，小量分裝，專一保存，防止它用。配制試劑用新器具，用后作一次性處理。
（5)試劑管用前先瞬時(shí)離心（10s)，使液體沉于管底，減少污染手套與加樣器機(jī)會(huì)。
�。�6)最后加模板DNA（包括在石蠟油后)，馬上蓋好，混勻，瞬時(shí)離心（10s)，使水相與有機(jī)相分開。加入模板且忌噴霧污染，所有非即用管都應(yīng)蓋嚴(yán)。加模板DNA后應(yīng)更換手套。
�。�7)實(shí)驗(yàn)設(shè)陽性、陰性對(duì)照。
