四、結(jié)果的可比性
1．陽性結(jié)果的判斷要正確判斷陽懷結(jié)果，必須掌握研究對象的組織學和病理學知識及光鏡下的形態(tài)特點。如研究胃粘膜中抗體產(chǎn)生細胞應當掌握在HE染色時的車輪狀核位于胞漿一側(cè)，胞漿特別豐富，染色時僅胞漿著色而核不著色等特點。同時應了解所研究的抗原在組織中的大致定位及分布規(guī)律。如分泌5-羥色胺的內(nèi)分泌細胞多位于固有層間質(zhì)內(nèi)，VIP和SP分布在固有層神經(jīng)末梢及粘膜下層的神經(jīng)元，胃泌素細胞分布胃腸腺體細胞之間。CEA多分布在腺癌細胞，如果在固有層內(nèi)出現(xiàn)陽性細胞，要謹慎對待，必須排除污染、內(nèi)源酶或自發(fā)熒光，同時與連續(xù)切片的HE染色切片對比觀察才能作出判斷。
2．陽性結(jié)果的定量分析免疫細胞化學和免疫組織化學染色受到的影響因素較多，最好在相同組織加工方面、統(tǒng)一批號抗血清和標記抗體、統(tǒng)一染色技術(shù)和結(jié)果判定方法，同時對病態(tài)和正常組織進行對照觀察才能增加可比性。用免疫組織化學進行抗原定量分析時，可根據(jù)著色程度，選用某一基點為標準進行半定量計數(shù)，但容易受主觀因素的影響。近年來，數(shù)字減影技術(shù)的應用，大大提高了定量研究的準確性。對陽性細胞的計數(shù)，多采取以下幾種方法：
�。�1)直接計數(shù)法：以10～20個隨意選擇的高倍視野直接進行陽性細胞計數(shù)，或計算100～200個總細胞中陽性細胞的數(shù)量。由于陽性細胞分布的不均勻性，可能存在一定誤差。
�。�2)體積計數(shù)法：測定單位面積內(nèi)的細胞數(shù)，再算出每立方毫米體積內(nèi)陽性細胞總數(shù)。一般組織切片只有5～7μm厚，與1mm厚度組織切片的細胞密度不可能完全一致。
�。�3)細胞密度計數(shù)法：即計算單位粘膜面積的陽性細胞數(shù)。有人提出以0.5mm寬，粘膜切面會層（約0.6mm)作為一個單位。因內(nèi)窺鏡取材時，組織塊不規(guī)則，顯微鏡下要具體選擇有一定困難，。我們用改良的Dellesses公式進行計算比較方便。原公式NV=N（P∑r2)×109，NV代表每立方毫米體積細胞數(shù)；N代表細胞總數(shù)，r為測微器小方格邊長（μm)；∑為切片厚度（μm)；P為小方格數(shù)。我們只計算每平方毫米面積細胞數(shù)，即D=N/（P∑r2)（r單位為mm)。方和邊長為0.5mm的測微器放在目鏡下，物鏡放大4倍，即用測微器去量放大4倍的物體，測出的邊長必須縮小4倍才是物體的真正面積，已知r為0.5mm，將上述數(shù)據(jù)代入公式，得D=N（r/4)2=16N/(Pr2)=16N/(P(0.5)2)=64N/P。只要計算整個組織切片的細胞數(shù)和所占小方格數(shù)，即可得出陽性細胞密度（細胞數(shù)/mm2)。組織分離細胞可通過流式細胞儀進行計數(shù)。
