二、進(jìn)行微循環(huán)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的幾個(gè)原則
(一)動(dòng)物的麻醉
遠(yuǎn)在1944年曾有人在微循環(huán)的研究中發(fā)現(xiàn):給小動(dòng)物進(jìn)行戊巴比妥鈉注入時(shí),劑量若超過(guò)3mg/100g體重,則不能得到預(yù)期的血管動(dòng)物。也有人報(bào)導(dǎo),快速注入烏拉坦能誘發(fā)血栓形成。因此,動(dòng)物麻醉藥物的選擇和劑量,以及麻醉藥的配伍都是實(shí)驗(yàn)中的重要環(huán)節(jié)。
微循環(huán)實(shí)驗(yàn)研究中幾種常用動(dòng)物的麻醉藥配伍和劑量用法:
1.貓:35mg/kg體重戊巴比妥鈉腹腔注入:70mg/kg體重氯醛糖或700mg/kg體重烏拉坦腹腔注入;75mg/kg體重α氯醛糖,靜脈注射。
2.金黃地鼠:30mg/kg體重戊巴比妥鈉腹腔注入(如實(shí)驗(yàn)時(shí)間短可25mg/kg重體)。
3.家兔:35-40mg/kg體重戊巴比妥鈉腹腔注入。
4.大白鼠、小白鼠等小動(dòng)物:25mg/kg體重戊巴比妥鈉腹腔注入或肌注,或130mg/100g體重烏拉坦肌注。
動(dòng)物處于正常麻醉狀態(tài)時(shí),角膜反射抑制,保持平穩(wěn)的胸式呼吸。如出現(xiàn)呼吸抑制或深腹式呼吸,則說(shuō)明用藥過(guò)量。以上麻醉劑量可維持2~3小時(shí)較好的麻醉狀態(tài)。如需繼續(xù)麻醉,可追加原用藥量的三分之一。
有些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不需麻醉,可在動(dòng)物清醒狀態(tài)下進(jìn)行,如兔眼球結(jié)膜微循環(huán)的檢查方法等。
(二)恒溫灌流
原則上,動(dòng)物器官或組織的灌流液應(yīng)是與該器官或組織周?chē)w液環(huán)境的成份和pH完全一樣,例如對(duì)腸系膜來(lái)說(shuō)應(yīng)有腹腔內(nèi)液的環(huán)境,但是很難做到的。
Zweifach認(rèn)為:無(wú)論應(yīng)用什么灌流液,首先應(yīng)使它成為膠體狀態(tài),即在灌流液中加入明膠,使之成為1%的明膠溶液。
灌流液中應(yīng)該通過(guò)適量的氧和二氧化碳。灌流液的pH應(yīng)以緩沖液調(diào)至中性(pH為7.35)灌流液的溫度應(yīng)以控制器控制在動(dòng)物正常體溫范圍。灌流液在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)不停地慢速更換。常用的灌流液有林格氏液、臺(tái)氏液、凱氏液、生理鹽水等。灌流裝置和所觀察的動(dòng)物應(yīng)放在裝有可調(diào)節(jié)的恒溫實(shí)驗(yàn)觀察箱中進(jìn)行,此點(diǎn)在冬季顯得尤為重要。將實(shí)驗(yàn)觀察箱中的溫度調(diào)節(jié)到與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體表溫度相近的溫度,最好在25~30℃。
。ㄈ)照明裝置
照明裝置的溫度一般不能超過(guò)動(dòng)物體溫。最好保持在25~30℃,否則會(huì)引起血管擴(kuò)張及微血流異常。照射燈光最好不改變血液自然的色調(diào),否則不易辨別血氧飽和程度。最理想的照明裝置是纖維光束冷光源,尤其在進(jìn)行肝、脾、腎等臟器的微循環(huán)觀察時(shí),沒(méi)有可以伸進(jìn)腹腔去的冷光源照明棒是很難進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的。
實(shí)驗(yàn)時(shí)用的照明光源,應(yīng)該具備三個(gè)條件,即強(qiáng)、聚、“冷”。目前常用的有兩種照明裝置,一種是高壓水銀燈(220V,80W),此光源的優(yōu)點(diǎn)是光線強(qiáng),產(chǎn)熱較少,血管與底色間反差強(qiáng),缺點(diǎn)是血色不真實(shí),光源觸發(fā)啟動(dòng)慢。另一種是鎢鹵素?zé)簦?~12V,40~100W),后者具有體積小巧,光線白亮,啟動(dòng)快的優(yōu)點(diǎn)。鎢鹵素?zé)艨捎蔑@微鏡燈加以改裝,因其有透鏡,能調(diào)節(jié)焦距,又能達(dá)到“聚光”的目的,再在此燈前加上藍(lán)綠色的隔熱濾光片,即可控制光源溫度,達(dá)到相對(duì)“冷光”的要求。此種照明光源能在普通室內(nèi)保證顯微鏡下視野清晰,而且對(duì)觀察指標(biāo)影響較小。
(四)記錄系統(tǒng)
動(dòng)物微循環(huán)的瞬間變化常采用顯微攝影裝置來(lái)記錄。選擇好顯微照相裝置及相應(yīng)的洗相設(shè)備。為了保證攝影的成功,凡是活體攝影,均需要使用拆射光源,要使用快片(24定以上的微粒膠卷)攝影,這是一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題,還要增強(qiáng)反差(用綠色濾光片增強(qiáng)血管與底色間的的反差)。
照相機(jī)是一般的記錄工具,它只能留下瞬間的圖象,有條件最好能拍攝電影或進(jìn)行彩色磁帶錄像。
對(duì)于管徑掃描的曲線、血流流態(tài)曲線或微壓力曲線要用示波器或多導(dǎo)記錄器進(jìn)行記錄,如能用微處理機(jī)記錄并貯存上述信號(hào)則更理想。