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細(xì)菌的突變

 

  二、基因突變類型

  在明確了細(xì)菌培養(yǎng)環(huán)境條件僅起選擇作用后,學(xué)者們采用了一些選擇方法以獲得突變株,這些突變株的應(yīng)用對研究遺傳變異及開展有基因工程都很有幫助。大從數(shù)利用的突變型均為大腸桿菌或鼠傷寒沙門氏菌,因這兩種細(xì)菌營養(yǎng)要求不高,僅需鹽、微量金屬離子及有限的氮、碳來源即可生長繁殖。未發(fā)生突變的菌株稱為野生型,而發(fā)生突變的菌株則根據(jù)選擇條件可分為:

  1.營養(yǎng)缺陷型:突變后因某種酶的缺失需要額外添加某種營養(yǎng)成份方能生長繁殖者。一般用“+”代表能利用自然存在的某種成份或能合成某種成份的中間體,而“—代表不能合成該成份的菌株。如his-則代表組氨酸缺陷型,需在培養(yǎng)基中加入組氨酸。

  2.抗性突變型:一般以S代表對化學(xué)藥物或抗生素敏感,r代表有抵抗力。如str8代表該菌株對鏈霉素敏感,在有鏈霉素存在時(shí)不能生長。這類突變型最易獲得,應(yīng)用亦廣。

  3.發(fā)酵陰性突變型:突變后失去發(fā)酵某種糖的能力但仍能利用其他糖做為碳源。這是由于突變后失去能分解該糖的酶。由于乳糖發(fā)酵可用指示劑根據(jù)pH改變而顯示,故可Lac-(乳糖發(fā)酵陰性)突變株作為研究工具。

圖5-2 細(xì)菌影印培養(yǎng)試驗(yàn)

1.從普通培養(yǎng)基上將皿上長的細(xì)菌,用絲絨影印至含鏈霉素培養(yǎng)基上,耐菌細(xì)菌不多。
2.從不接觸鏈霉素的平皿上,按影印顯示耐鏈霉素菌落區(qū)挑取細(xì)菌增菌。
3.將102細(xì)菌接種普通培養(yǎng)基上再作影印,再按耐鏈霉素平皿上相應(yīng)菌落處接種增菌。
4.未接觸鏈霉素的平皿上,全部細(xì)菌均耐鏈霉素。

  4.條件致死性突變型:在某一條件下具有致死效應(yīng),突變株不能生長,但在另一沒有致死效應(yīng)的條件下仍可生長。最常用者為溫度敏感性突變型。它們在親代能生長的溫度范圍內(nèi)特別是較高濕度(42℃)不能生長,但在較低溫度(25℃)則能生長。這種菌株稱為ts株。其發(fā)生的原因是某些酶的肽鏈結(jié)構(gòu)發(fā)生改變后,降低了酶的抗熱性。因此在較高溫度下不能生存。這種用溫度篩選突變株的方法比較簡便,應(yīng)用較多。

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