生物堿類藥物（重點在鑒別，N的位置，有哪些電效應）
苯烴胺類（鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿）

氮原子在側鏈上，堿性較一般生物堿強，易與酸成鹽。

托烷類（硫酸阿托品和氫溴酸山莨菪堿）

阿托品和山莨菪堿是由托烷衍生的醇（莨菪醇）和莨菪酸縮合而成，具有酯結構。分子結構中，氮原子位于五元酯環(huán)上，故堿性也較強，易與酸成鹽。

喹啉類（硫酸奎寧和硫酸奎尼�。�

奎寧和奎尼丁為喹啉衍生物，其結構分為喹啉環(huán)和喹啉堿兩個部分，各含一個氮原子，喹啉環(huán)含芳香族氮，堿性較弱；喹啉堿微脂環(huán)氮，堿性強。

異喹啉類（鹽酸嗎啡和磷酸可待因）

嗎啡分子中含有酚羥基和叔胺基團，故屬兩性化合物，但堿性略強；可待因分子中無酚羥基，僅存在叔胺基團，堿性較嗎啡強。

吲哚類（硝酸士的寧和利血平）

士的寧和利血平分子中含有兩個堿性強弱不同的氮原子，N1處于脂肪族碳鏈上，堿性較N2強，故士的寧堿基與一分子硝酸成鹽。

黃嘌呤類（咖啡因和茶堿）

咖啡因和茶堿分子結構中含有四和氮原子，但受鄰位羰基吸電子的影響，堿性弱，不易與酸結合成鹽，其游離堿即供藥用。

鑒別試驗：特征鑒別反應。

1.雙縮脲反應系芳環(huán)側鏈具有氨基醇結構的特征反應。

鹽酸麻黃堿和偽麻黃堿在堿性溶液中與硫酸銅反應，Cu2+與仲胺基形成紫堇色配位化合物，加入乙醚后，無水銅配位化合物及其有2 個結晶水的銅配位化合物進入醚層，呈紫紅色，具有4個結晶水的銅配位化合物則溶于水層呈藍色。

2.Vitali反應系托烷生物堿的特征反應。

硫酸阿托品和氫溴酸山莨菪堿等托烷類藥物均顯莨菪酸結構反應，與發(fā)煙硝酸共熱，即得黃色的三硝基（或二硝基）衍生物，冷后，加醇制氫氧化鉀少許，即顯深紫色。

3.綠奎寧反應系含氧喹啉（喹啉環(huán)上含氧）衍生物的特征反應硫酸奎寧和硫酸奎尼丁都顯綠奎寧反應，在藥物微酸性水溶液中，滴加微過量的溴水或氯水，再加入過量的氨水溶液，即顯翠綠色。

4.Marquis反應系嗎啡生物堿的特征反應。

取得鹽酸嗎啡，加甲醛試液，即顯紫堇色。靈敏度為0.05μg. 5.Frohde反應系嗎啡生物堿的特征反應。

鹽酸嗎啡加鉬硫酸試液0.5ml，即顯紫色，繼變?yōu)樗{色，最后變?yōu)樽鼐G色。靈敏度為0.05μg. 6.官能團反應系吲哚生物堿的特征反應。

利血平結構中吲哚環(huán)上的β位氫原子較活潑，能與芳醛縮合顯色。

與香草醛反應。利血平與香草醛試液反應，顯玫瑰紅色。

與對-二甲氨基苯甲醛反應。利血平加對-二氨基苯甲醛，冰醋酸與硫酸，顯綠色，再加冰醋酸，轉變?yōu)榧t色。

7.紫脲酸反應系黃嘌呤類生物堿的特征反應。

咖啡因和茶堿中加鹽酸與氯酸鉀，在水浴上蒸干，遇氨氣即生成四甲基紫脲酸銨，顯紫色，加氫氧化鈉試液，紫色即消失。

8.還原反應系鹽酸嗎啡與磷酸可待因的區(qū)分反應。

嗎啡具弱還原性。本品水溶液加稀鐵氰化鉀試液，嗎啡被氧化生成偽嗎啡，而鐵氰化鉀被還原為亞鐵氰化鉀，再與試液中的三氯化鐵反應生成普魯士藍。

可待因無還原性，不能還原鐵氰化鉀，故此反應為嗎啡與磷酸可待因的區(qū)分反應。

特殊雜質檢查：

利用藥物和雜質在物理性質上的差異。
硫酸奎寧中“氯仿-乙醇中不溶物”的檢查鹽酸嗎啡中“其它生物堿”的檢查旋光性的差異：用于硫酸阿托品中“莨菪堿”的檢查對光選擇性吸收的差異：利血平生產或儲存過程中，光照和有氧存在下均易氧化變質，氧化產物發(fā)出熒光。因此規(guī)定：供試品置紫外光燈（365nm）下檢視，不得顯明顯熒光。
吸附性質的差異：硫酸奎寧制備過程中可能存在“其它金雞納堿”。利用吸附性質的差異，采用硅膠G薄層進行檢查。規(guī)定限度為0.5%.利用藥物和雜質和化學性質上的差異。

與一定試劑反應產生沉淀硫酸阿托品制備過程中可能帶入（如莨菪堿、顛茄堿）雜質，因此需要檢查“其它生物堿”。利用其它生物堿堿性弱于阿托品的性質，取供試品的鹽酸水溶液，加入氨試液，立即游離，發(fā)生渾濁。規(guī)定0.25g藥物中不得發(fā)生渾濁。

與一定試劑產生顏色反應① 鹽酸嗎啡中阿撲嗎啡的檢查② 鹽酸嗎啡中罌粟堿的檢查③ 磷酸可待因中嗎啡的檢查④ 硝酸士的寧中馬錢子堿的檢查含量測定非水溶液滴定法：

生物堿類藥物一般具有弱堿性，通常可在冰醋酸或醋酐等酸性溶液中，用高氯酸滴定液直接滴定，以指示劑或電位法確定終點。

⑴氫鹵酸鹽的滴定在滴定生物堿的氫鹵酸鹽時，一般均預先在冰醋酸中加入醋酸汞的冰醋酸溶液，使氫鹵酸生成在冰醋酸中難解離的鹵化汞，從而消除氫鹵酸對滴定反應的不良影響。

加入的醋酸汞量不足時，可影響滴定終點而使結果偏低，過量的醋酸汞（理論量的1～3倍）并不影響測定的結果。

⑵硫酸鹽的測定硫酸為二元酸，在水溶液中能完成二級電離，生成SO42-，但在冰醋酸介質中，只能離解為HSO4-，不再發(fā)生二級離解。因此，生物堿的硫酸鹽，在冰醋酸的介質中只能被滴定至生物堿的硫酸氫鹽。

硫酸阿托品的含量測定。溶劑：冰醋酸和醋酐，指示劑：結晶紫，滴定液：高氯酸。至溶液顯純藍色。

硫酸奎寧的含量測定。1摩爾的硫酸奎寧可消耗3摩爾的高氯酸。

硫酸奎寧片的含量測定。硫酸奎寧經強堿溶液堿化，生成奎寧游離堿，在與高氯酸反應，因此1摩爾的硫酸奎寧可消耗4摩爾的高氯酸。

⑶硝酸鹽的測定：

硝酸在冰醋酸介質中雖為弱酸，但是他具有氧化性，可以使指示劑變色，所有采用非水溶液滴定法測定生物堿硝酸鹽時，一般不用指示劑而用電位法指示終點。

如硝酸士的寧。

⑷磷酸鹽的測定：

磷酸在冰醋酸介質中的酸性極弱，不影響滴定反應的定量完成，可按常法測定。

磷酸可待因。

提取中和法提取中和法是根據生物堿鹽類能溶于水而生物堿不溶于水的特性，可以采用有機溶劑提取后測定。

堿化、提取、滴定。按下列任何一種方法處理后測定：

① 將有機溶劑蒸干，于殘渣中加定量過量的酸滴定液使溶解，再用堿滴定液回滴剩余的酸；若生物堿易揮發(fā)或分解，應在蒸至近干時，先加入酸滴定液“固定”生物堿，再繼續(xù)加熱除去殘余的有機溶劑，放冷后完成滴定。

② 將有機溶劑蒸干，于殘渣中加少量中性乙醇使溶解，任何用酸滴定液直接滴定。

③ 不蒸去有機溶劑，而直接于其中加定量過量的酸滴定液，振搖，將生物堿轉提入酸液中，分出酸液置另一錐形瓶中，有機溶劑層再用水分次振搖提取，合并水提取液和酸液，最后用堿滴定液回滴定。

測定條件的選擇能使生物堿游離的堿化試劑有氨水、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、氫氧化鈣和氧化鎂等。但強堿不適用于下列生物堿類藥物的游離：

① 含酯結構的藥物，如阿托品和利血平等，與強堿接觸，易引起分解。

② 含酚結構的藥物，如嗎啡，可與強堿形成酚鹽而溶于水，難以被有機溶劑提取。

③ 含脂肪性共存物的藥物，當有脂肪性物質與生物堿共存時，堿化后易發(fā)生乳化，使提取不完全。

因此氨水為最常用的堿化試劑。

提取溶劑應具備下列條件：

① 與水不相混溶，沸點低，對生物堿的溶解度大，而對其它物質的溶解度應盡可能最小。

② 與生物堿或堿化試劑不起任何反應。

常用者為乙醚和氯仿，其中氯仿應用更為廣泛。

提取溶劑的用量通常應提取4次，第一次用量至少應為水液體積的一半，以后幾次所用溶劑的體積應各為第一次的一半。如果水液體積很小時，第一次提取溶劑的用量則應與水液相等。

提取終點的確定取最后一次的提取液約0.5ml，置小試管中，加鹽酸或硫酸（0.1mol/L）1ml，放水浴上將有機溶劑蒸去，放冷，滴加生物堿沉淀劑（如碘化鉍鉀試液等）1滴，無沉淀產生，即為提取已完全。
指示劑的選擇磷酸可待因片劑分析：
酸性染料比色法原理：在適當?shù)膒H介質中，生物堿類藥物（B）可與氫離子結合成鹽（BH+），一些酸性染料（如磺酸酞類的指示劑：溴麝香草酚藍、溴甲酚綠等）在此介質中能解離為陰離子（In-），同時，陽離子和陰離子又能定量地結合成有色的離子對化合物，即離子對。

離子對被合適的有機溶劑提取后，形成有色溶液，可供比色測定。

影響定量分析的因素1.水相的最適pH值2.酸性染料的影響提取完全是提取常數(shù)和酸性染料陰離子的濃度密切相關的，而提取常數(shù)的大小由是與B-的種類和有機溶劑的選擇密切相關的。一般用的有甲基橙、溴麝香草酚藍（BTB）和溴甲酚綠等。

3.有機溶劑的影響離子對提取常數(shù)的大小還與有機溶劑的性質有關。通常有機溶劑與離子對形成氫鍵的能力強，則提取效率高，如氯仿和二氯甲烷等具有中等程度的提取率，并且提取的選擇性也較好，為最常用的有機溶劑。

4.水分的影響有有機溶劑提取有色的離子對時，應嚴防水分的混入。

5.共存物的影響：一般賦形劑，重型、酸性乙基弱堿性的物質均不干擾測定，強酸可改變染料溶液或緩沖液的pH，因而對測定有干擾。

以上五種影響因素中，水相的最適pH和有機溶劑對離子對的提取完全是酸性染料比色法的試驗關鍵。

應用與實例硫酸阿托品片劑紫外分光光度法利血平含量測定，注意避光操作。

糖類和苷類藥物單糖和雙糖分子中有不對稱碳原子，均具有一定的比旋度。

鑒別試驗1.灼燒試驗：糖類用直火加熱，先熔融膨脹，后燃燒并發(fā)生焦糖臭，遺留多量的炭。蔗糖的鑒別可應用本試驗。

2.Fehling反應單糖或含有半縮醛基的雙糖分子結構中，均有醛基或酮基，都具有還原性。Fehling反應是在堿性酒石酸銅試液（Fehling試液）中，糖將銅離子還原，生成紅色的氧化亞銅沉淀。

葡萄糖的鑒別可用此反應（無水葡萄糖、葡萄糖注射液、葡萄糖氯化鈉注射液和莪術油葡萄糖均用Fehling反應）

蔗糖的鑒別：加硫酸煮沸，用氫氧化鈉中和，再加堿性酒石酸銅試液，加熱，生成氧化亞銅的紅色沉淀。

葡萄糖和乳糖的雜質檢查葡萄糖的一般檢查項目：酸度、氯化物和硫酸鹽；溶液的澄清度與顏色；乙醇溶液的澄清度；亞硫酸鹽與可溶性淀粉。

葡萄糖注射液中5-羥基糠醛的測定：紫外分光光度法。

乳糖的雜質檢查：利用蛋白質類雜質遇硝酸汞試液產生的白色絮狀沉淀，進行特殊雜質“蛋白質”的檢查。

原料藥的含量測定：葡萄糖、乳糖和蔗糖不規(guī)定含量測定，規(guī)定比旋度的范圍。

制劑：葡萄糖注射液的含量測定：旋光度法。

測定中加入氨試液的作用：由于藥用葡萄糖是D-葡萄糖，而D-葡萄糖有α和β兩種互變異構體，因而藥用葡萄糖是他們的混合物，比旋度相差甚遠，而在水溶液中逐漸平衡，稱作變旋。加熱、加酸或加弱堿可加速平衡。

計算因素1.0426的由來：

換算為含稅葡萄糖濃度（c‘）時，則應為：

葡萄糖氯化鈉注射液含量測定：硝酸銀滴定法，每1ml硝酸銀滴定液（0.1mol/L）相當于5.844mg的NaCl.加糊精溶液以形成保護，使氯化銀沉淀呈膠體狀態(tài)，則具有較大的表面，有利于對指示劑的吸附，有利于滴定終點的觀察。

加硼砂溶液是為了增加pH值，因為本品pH值過低，而pH值低于3.5時，則五沉淀出現(xiàn)。加入2.5%硼砂溶液2ml后，溶液pH值為7，可促使熒光黃電離，以增大熒光黃陰離子的有效濃度，使重點變化敏銳。

苷類藥物苷類為糖的衍生物（如氨基糖、糖醛酸等）與另一非糖有機化合物通過糖的端基碳原子連接而成的化合物。

鑒別試驗：

1.Keller-Kiliani反應α-去氧甲基五碳糖的反應α-去氧糖類，如洋地黃毒糖和磁麻糖，是由糖類分子中與羰基相鄰近的“CHOH”基失去氧，轉變?yōu)椤癈H2”后的結構。具有較大的活潑性，由α-去氧糖與苷元結合的生成物（即苷類）容易水解。

將甾體強心苷溶于含有微量FeCl3（1滴9% FeCl3）的冰醋酸1～2ml中，沿管壁緩緩加入濃硫酸1～2ml，使成兩液層。兩液層交界面處顯棕色（甲地高辛顯紫色）；醋酸層顯藍色或藍綠色，放置1h后顯靛藍色。

2.Kedde反應苷元的不飽和內酯側鏈反應。

甾體強心苷元的C17上常有α-β或β-γ的不飽和內酯，即丁烯內酯，在堿性水溶液中易與芳香硝基化合物形成有色的絡合陰離子。

Kedde反應用于去乙酰毛花苷的鑒別。

加乙醇溶解后加二硝基苯甲酸試液與乙醇制氫氧化鉀試液各10滴，搖勻后，溶液即顯紅紫色。

3.色譜法① 紙色譜法：用于地高辛的鑒別② 薄層色譜法：用于去乙酰毛花苷及其注射液的鑒別，采用硅藻土G薄層板。

③ 高效液相色譜法：用于甲地高辛及其片劑的鑒別特殊雜質的檢查藥物 特殊雜質 允許限量 檢查方法洋地黃毒苷 洋地黃皂苷 本品10mg溶于2ml乙醇后，加膽甾醇的醇溶液，10min內，不得發(fā)生沉淀地高辛 洋地黃毒苷 6% 紙色譜法甲地高辛 有關物質 5% 高效液相色譜法去乙酰毛花苷 有關物質 10% 薄層色譜法含量測定1.比色法：甾體強心苷元C17上的丁烯內酯部分是非�；顫姷�，很容易和芳香硝基化合物（如堿性三硝基苯酚試液）形成絡合陰離子。所得絡合物在可見光去具有特征的最大吸收峰（λmax為485～495nm）。

本法用于地高辛、去乙酰毛花苷及其注射液的含量測定2.熒光法：利用L-抗壞血酸與過氧化氫等實際可使地高辛或洋地黃毒苷產生熒光的原理，提高了定量分析的靈敏度，從而可用于每片含主藥量分別僅為0.25mg和0.1mg的片劑的含量測定。

地高辛片含量，含量勻度（限度為20%），溶出度（限度為65%，轉籃，100r/min，60min）

甲地高辛溶出度測定與地高辛一樣，限度規(guī)定相同。

3.色譜法：

① 柱色譜法：用于洋地黃毒苷原料藥測定的純化處理② 高效液相色譜法：用于甲地高辛及其片劑的含量測定，內標：洋地黃毒苷。