|
生物檢定統(tǒng)計(jì)法
一、總則
生物檢定法是利用藥物對生物體或其離體器官組織等所起的藥理作用來檢定藥物效價(jià)的方法，用于無適當(dāng)理化方法進(jìn)行檢定的藥物。
生物檢定統(tǒng)計(jì)法主要敘述應(yīng)用生物檢定時(shí)必須注意的基本原則、一般要求、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及統(tǒng)計(jì)方法。有關(guān)品種用生物檢定的具體實(shí)驗(yàn)條件和要求，必須按照該品種生物檢定法項(xiàng)下的規(guī)定。
生物檢定標(biāo)準(zhǔn)品 凡中國藥典規(guī)定用生物檢定的品種都有它的生物檢定標(biāo)準(zhǔn)品(S)。(S)都有標(biāo)示效價(jià)，以效價(jià)單位(u)表示，其含義和相應(yīng)的國際標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià)單位一致。
供試品
供試品（T）或（U）是供檢定其效價(jià)的樣品，它的活性組分應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品基本相同。
A<[T]>或A<[u]>是（T）或（U）的標(biāo)示量或估計(jì)效價(jià)。
等反應(yīng)劑量對比
生物檢定是將（T）和其（S）在相同的實(shí)驗(yàn)條件下同時(shí)對生物體或其離體器官組織等的作用進(jìn)行比較，通過對比，計(jì)算出它們的等反應(yīng)劑量比值(R),以測得（T）的效價(jià)P<[T]>。
R是（S）和（T）等反應(yīng)劑量（ds、dT）的比值，即R＝ds／dT。
M是（S）和（T）的對數(shù)等反應(yīng)劑量（xs、xT）之差，即
M＝logds－logdT＝xs－xT。R＝antilogM。
P<[T]>是通過檢定測得（T）的效價(jià)含量,稱（T）的測得效價(jià)；是將效價(jià)比值(R)用(T)的標(biāo)示量或估計(jì)效價(jià)A<[T] >校正之后而得。即P<[T]>=A<[T]>·R或P<[T]>＝A<[T]> ·antilogM。
檢定時(shí)，（S）按標(biāo)示效價(jià)計(jì)算劑量,（T）按標(biāo)示量或估計(jì)效價(jià)(A<[T]>)計(jì)算劑量,注意調(diào)節(jié)（T）的劑量或調(diào)整其標(biāo)示量或估計(jì)效價(jià),使(S)和(T)的相應(yīng)劑量組所致的反應(yīng)程度相近。
生物變異的控制
生物檢定具有一定的實(shí)驗(yàn)誤差，其主要來源是生物變異性。因此生物檢定必須注意控制生物變異，或減少生物變異本身，或用適宜的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)來減小生物變異對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，以減小實(shí)驗(yàn)誤差�？刂粕镒儺惐仨氉⒁庖韵聨c(diǎn)。
(1) 生物來源、飼養(yǎng)或培養(yǎng)條件必須均一。
(2) 對影響實(shí)驗(yàn)誤差的條件和因子，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)盡可能作為因級限制，將選取的因級隨機(jī)分配至各組。例如體重、性別、窩別、雙碟和給藥次序等都是因子，不同體重是體重因子的級，雌性雄性是性別因子的級，不同窩的動(dòng)物是窩別因子的級，不同雙碟是碟間因子的級，給藥先后是次序因子的級等。按程度劃分的級（如動(dòng)物體重），在選級時(shí)，應(yīng)選動(dòng)物較多的鄰近幾級，不要間隔跳越選級。
(3) 按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)類型的要求將限制的因級分組時(shí)，也必須嚴(yán)格遵守隨機(jī)的原則。
誤差項(xiàng)
指從實(shí)驗(yàn)結(jié)果的總變異中分去不同劑量及不同因級對變異的影響后，剩余的變異成分，用方差(S<2>)表示。對于因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)類型的限制無法分離的變異成分，或估計(jì)某種因級對變異的影響小，可不予分離者，都并入S<2>。但劑間變異必須分離。
誤差項(xiàng)的大小影響標(biāo)準(zhǔn)誤S<[M]>和可信限（FL）。
不同的檢定方法和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)類型，分別按有關(guān)的公式計(jì)算S<[2]>。
可靠性測驗(yàn)
平行線檢定要求在實(shí)驗(yàn)所用的劑量范圍內(nèi)，對數(shù)劑量的反應(yīng)（或反應(yīng)的函數(shù)）呈直線關(guān)系，供試品和標(biāo)準(zhǔn)品的直線應(yīng)平行�？煽啃詼y驗(yàn)即驗(yàn)證供試品和標(biāo)準(zhǔn)品的對數(shù)劑量反應(yīng)關(guān)系是否顯著偏離平行偏離直線，對不是顯著偏離平行偏離直線（在一定的概率水平下）的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，認(rèn)為可靠性成立，方可按有關(guān)公式計(jì)算供試品的效價(jià)和可信限。
可信限可信限（FL）標(biāo)志檢定結(jié)果的精密度。M的可信限是M的標(biāo)準(zhǔn)誤S<[M]>和t值的乘積（t·S<[M]>），用95％的概率水平。M＋t·S<[M]>是可信限的高限；M－t·S<[M]>是可信限的低限。用其反對數(shù)計(jì)算得R和P<[T]> 的可信限低限及高限，是在95％的概率水平下從樣品的檢定結(jié)果估計(jì)其真實(shí)結(jié)果的所在范圍。
R或P<[T]>的可信限率（FL％）是用R或P<[T]>的可信限計(jì)算而得。
計(jì)算可信限的t值是根據(jù)S<2>的自由度（f）查t值表而得。
t值與f的關(guān)系見表一。
表一 t值表（P＝0.95）
────┬───┬───┬───┬───┬───┬───┬────
f │ t │ f │ t │ f │ t │ f │ t
────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────
3 │ 3.18 │ 8 │ 2.31 │ 14 │ 2.15 │ 30 │ 2.04
4 │ 2.78 │ 9 │ 2.26 │ 16 │ 2.12 │ 40 │ 2.02
5 │ 2.57 │ 10 │ 2.23 │ 18 │ 2.10 │ 60 │ 2.00
6 │ 2.45 │ 11 │ 2.20 │ 20 │ 2.09 │ 120 │ 1.98
7 │ 2.37 │ 12 │ 2.18 │ 25 │ 2.06 │ ∞ │ 1.96
────┴───┴───┴───┴───┴───┴───┴────
各品種的檢定方法項(xiàng)下都有其可信限率的規(guī)定,如果檢定結(jié)果不符合規(guī)定,可縮小動(dòng)物體重范圍或年齡范圍，或調(diào)整對供試品的估計(jì)效價(jià)或調(diào)節(jié)劑量，重復(fù)實(shí)驗(yàn)以減小可信限率。
對同批供試品重復(fù)試驗(yàn)所得n次實(shí)驗(yàn)結(jié)果(包括FL％超過規(guī)定的結(jié)果)，可按實(shí)驗(yàn)結(jié)果的合并計(jì)算法算得P<[T]>的均值及其FL％作為檢定結(jié)果。
二、直接測定法
直接測得藥物對各個(gè)動(dòng)物最小效量或最小致死量的檢定方法。如洋地黃及其制劑的效價(jià)測定。
xs和xT為S和T組各只動(dòng)物的對數(shù)最小致死量， 它們的均值Ｙs和ＹT為S和T的等反應(yīng)劑量，n<[s]>和nT為S和T組的動(dòng)物數(shù)。
�。ㄗⅲ河捎谟�(jì)算機(jī)內(nèi)無均值符號(hào)，故用Ｙs和ＹT代替。
1.效價(jià)計(jì)算
按(1)～(3)式計(jì)算M、R和P<[T]>。
M＝Ｙs －ＹT
(1)
R＝antilog（Ｙs-ＹT）＝antilog M
(2)
P<[T]>＝A<[T]>·R
(3)
2.誤差項(xiàng)及可信限計(jì)算
按(4)～(8)式計(jì)算S<2>、S<[M]>及R或P<[T]>的FL和FL％。
∑(Xs)<2> （∑XT）<2>
∑(Xs)<2>－ ───── ＋∑(XT)<2>－ ─────
ns nT
S<2> ＝────────────────────────── (4)
ns＋nT－2
f＝ns＋nT－2
用此自由度查表一得t值
┌─────────────
│ ns＋nT
S<[M]>＝ │ S<2> ·──────
√ ns·nT
R的FL＝antilog(M±t·S<[M]>)
[1] [2] 下一頁
... |
