試劑空白:
由于生化測(cè)試測(cè)量的吸光度為相對(duì)吸光度,所以從理論上說,所有終點(diǎn)法的測(cè)試都需要把試劑本身的吸光度扣除。試劑本身的吸光度就是試劑空白。測(cè)量方法是按照正常測(cè)試的試劑和樣本量,把樣本換成蒸餾水來測(cè)量。
在傳統(tǒng)手工方法中,每次測(cè)定都要做至少三個(gè)管:測(cè)定管、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管。其中空白管是試劑加蒸餾水,測(cè)出來也就是試劑空白。因?yàn)椴僮鳝h(huán)境、儀器狀態(tài)、試劑穩(wěn)定性等變異,所以要求每次都要測(cè)定試劑空白,稱為實(shí)時(shí)試劑空白。
在全自動(dòng)分析儀上,大體上是模擬手工操作。但許多全自動(dòng)分析儀為追求速度,在設(shè)計(jì)上采用一些折中方法來測(cè)定試劑空白。以日立全系列生化儀為例。該系列分析儀是做不了實(shí)時(shí)試劑空白,因?yàn)樗鼈內(nèi)窍燃尤霕颖竞蠹釉噭,為了折中,只好在定?biāo)時(shí)做一個(gè)試劑空白,保存起來,需要扣除試劑空白時(shí)再減這個(gè)預(yù)先保存的值。這種做法,對(duì)于比較穩(wěn)定的試劑來講,對(duì)結(jié)果影響不大。
通俗的講,日立的儀器工作流程中首先是將標(biāo)本加入到比色杯中,然后依次加入R1試劑、R2試劑,所以試劑空白在每個(gè)測(cè)定項(xiàng)目曲線中是無法看到的。但是7170從CALIBRATION中是可以看到的,S1ABS就是代表試劑空白吸光度,在CALIBRATION畫面里的下方找到ReactionMonitor(反應(yīng)監(jiān)察),其中STD(1)就是代表試劑空白反應(yīng)曲線。為了減小誤差,日立儀器會(huì)連續(xù)做兩次測(cè)定,所以你看到FIRST和SECOND兩條,計(jì)算時(shí)是取他們的平均值。做試劑空白目的之一就是觀察試劑是否穩(wěn)定,積極采取措施糾正。對(duì)于日立的這種試劑空白測(cè)定很多儀器都采用這種方法,也叫做試劑空白校準(zhǔn)。
總的說來,自動(dòng)生化儀上的試劑空白一般表現(xiàn)為零點(diǎn)吸光度,該吸光度是通過校準(zhǔn)確立的。
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