1 毒種
與A1項相同。
2 細胞
2.1 細胞株
用于疫苗生產(chǎn)的人二倍體細胞株必須不含外源因子，核型正常，對病毒敏感�？捎肒MB-17、2BS等株。所用細胞株須經(jīng)衛(wèi)生部批準。
2.2 原始細胞種子批
一個細胞種子批，應(yīng)有足夠量的早世代細胞，分裝安瓿保存于液氮中。
2.3 生產(chǎn)用細胞種子批
用一個或多個安瓿細胞種子，傳代繁殖到適宜世代，具有一定量的均一細胞，分裝安瓿，凍存于液氮中。
2.4 生產(chǎn)用細胞種子批檢定
按《人二倍體細胞建株、檢定及制備疫苗規(guī)程》要求進行。
3 疫苗制備
3.1 細胞培養(yǎng)
從生產(chǎn)用細胞種子開始培養(yǎng)，以適宜分種率連續(xù)傳代，直至累積足夠量的細胞培養(yǎng)物。用于生產(chǎn)的細胞代次應(yīng)在整個生命周期的前2/3代次內(nèi)。
3.2 病毒接種、培養(yǎng)與收集
與A2.2項相同。
3.3 病毒液合并
與A2.3項相同。
3.4加氯化鎂與分批
與A2.4項相同。
3.5 分裝
與A2.5項相同。
4 檢定
4.1 生產(chǎn)用人二倍體細胞外源因子檢查
于種毒當天，每批細胞留取2%～5%不種毒，換液作為正常細胞對照，以檢查外quanxiangyun.cn/hushi/源因子。從接種之日起，觀察2周，其形態(tài)不應(yīng)有改變。
于種毒0～2天，對照細胞上清液接種原代幼兔腎、非人靈長類傳代細胞及另一株人二倍體細胞。接種的樣品量應(yīng)占維持液的20%以上，觀察14天。種毒后5～8天用上述細胞盲傳一代，傳代后觀察14天，應(yīng)無細胞病變。
在種毒時，用0.5%雞、豚鼠混合紅細胞在4～8℃和20～25℃做血吸附試驗，檢查對照細胞。
4.2細胞鑒別試驗
在生產(chǎn)用細胞水平世代或其后數(shù)代，作中期細胞染色體檢查，粗數(shù)300個細胞，細數(shù)100個細胞，其核型應(yīng)正常。以鑒別確為生產(chǎn)用細胞無誤。
4.3 病毒液檢定
4.3.1 外源因子檢查
樣品以脊髓灰質(zhì)炎病毒型特異性抗體（非人源抗體，該抗體不能用猴制備，免疫用的抗原不能用生產(chǎn)用的細胞制備)或單克隆抗體中和，中和物（可稀釋，但稀釋度不應(yīng)超過1∶4)接種對麻疹病毒敏感的細胞和另一株人二倍體細胞，并留取正常細胞對照，37℃培養(yǎng)觀察2周。觀察期間由于非特異原因廢棄的細胞瓶數(shù)應(yīng)少于20%。如發(fā)生任何因外源因子引起的細胞病變，則該批病毒液應(yīng)廢棄。
4.3.2 無菌試驗及支原體檢查
與A3.2.2項相同。
4.3.3 病毒quanxiangyun.cn/shouyi/滴定
結(jié)果判定蝕斑法為4～6天，其他同A3.2.3項。
4.3.4 型特異性檢定
與A3.2.4項相同。
4.3.5 猴體試驗
與A3.2.6項相同。
4.3.6rct特征試驗
與A3.2.7項相同。
4.4 成品檢定
與A3.3項相同。
5 保存與效期
與4項相同。
