1 試劑
1.1 用(人)HBsAg(亞型ad,ay)包被的聚乙烯珠子。
1.2 125I標記的(人)HBsAg(亞型ad,ay)試液。
1.30.01mol/L Tris緩沖液,內含4%牛血清白蛋白,pH7.4。
1.4 抗-HBs參比標準品,含抗-HBs10~160mIU /ml。采用四點法 或www.med126.com五點法。
2 測定
先將檢品按估計效價稀釋成不同倍數(shù),使其cpm計數(shù)落在參比標準品直線范圍內。一般10%肌注丙種球蛋白可進行10、20、40倍稀釋。乙型肝炎免疫球蛋白可進行500、1000、2000倍稀釋。正式試驗時根據(jù)預試結果調整稀釋倍數(shù)。預試驗用3個稀釋倍數(shù),正式試驗用2個稀釋倍數(shù)。
2.1 各取0.2ml參比標準品及不同稀釋倍數(shù)的檢品,加入反應盤的不同孔中。預試驗時每個稀釋倍數(shù)檢品加1孔,正式試驗每個稀釋倍數(shù)檢品加3孔。于每孔中小心加入一個HBsAg包被珠子,蓋上密封膠紙,振蕩或輕拍反應盤,排出氣泡,并使珠子全部浸入液體中,置室溫(15~www.med126.com30℃)結合18小時(16~20小時)。
2.2 去除膠紙,吸出孔內液體,每珠用4~5ml蒸餾水洗3次,最后一次盡量將水吸干。
2.3 于每孔中加0.2ml125I標記HBsAg試液,輕拍反應盤,排出氣泡,并使珠子全部浸入液體中,蓋上新的密封膠紙,置室溫結合4小時(或45℃水浴2小時),去除膠紙,按2.2項沖洗。
2.4 用紙試管架將珠子從反應盤轉移至塑料管中,其編號應與反應盤孔號一致。將反應管置適宜的井型γ計數(shù)器中計數(shù)cpm,洗后24小時內均可使用。
3 計算
3.1 先救求出參比標準品和各稀釋倍數(shù)檢品的平均cpm計數(shù),以參比標準品抗-HBsmIu /ml為橫座標,以cpm計數(shù)為縱座標在座標紙上作圖,連接各點成一直線。
3.2 從標準直線上查出各稀釋倍數(shù)檢品的cpm計數(shù)點,并從此點向下作一垂直線,在橫座標上查出抗-HBs mIU,再乘以檢品稀釋倍數(shù),除以1000,求出2點或3點的平均值即為該檢品的抗-HBs IU/ml。
4 注意事項
4.1 預試驗時應按試劑盒要求做陽性和陰性對照。
4.2 冰箱保存的試劑,用前應先于室溫內放置1小時。
4.3使用不能自動減本底的γ計數(shù)器時,應減本底后再計算。
4.4 所有測定操作應遵守同位素實驗室安全防護制度。