酶免疫技術(shù)是以酶標(biāo)記的抗體或抗原為主要試劑的方法，是標(biāo)記免疫技術(shù)的一種。近年來標(biāo)記免疫技術(shù)飛速發(fā)展，應(yīng)用不同標(biāo)記物，根據(jù)不同原理、不同技術(shù)建立起來的檢測方法層出不窮，而方法的創(chuàng)建者往往給同類的方法以不同的名稱。因此確知某一方法屬于哪一類型，對(duì)該方法的正確理解有著重要意義。本節(jié)先敘述各種標(biāo)記免疫技術(shù)的要點(diǎn)，然后介紹酶免疫技術(shù)的分類，這樣可以對(duì)酶免疫技術(shù)和其他非酶的標(biāo)記免疫技術(shù)的各種類型有一個(gè)總的概念。
免疫技術(shù)是利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行的檢測方法，即應(yīng)用制備好的特異性抗原或抗體作為試劑，以檢測標(biāo)本中的相應(yīng)抗體或抗原。它的特點(diǎn)是具有高度的特異性和敏感性。如將試劑抗原或試劑抗體用可以微量檢測的標(biāo)記物（例如放射性核素、熒光素、酶等)進(jìn)行標(biāo)記，則在與標(biāo)本中的相應(yīng)抗體或抗原反應(yīng)后，可以不必測定抗原抗體復(fù)合物本身，而測定復(fù)合物中的標(biāo)記物，通過標(biāo)記物的放大作用，進(jìn)一步提高了免疫技術(shù)的敏感性。這種標(biāo)記免疫技術(shù)一般分為兩類，一類用于組織切片或其他標(biāo)本中抗原或抗體的定位，另一類用于液體標(biāo)本中抗原或抗體的測定。前者屬于免疫組化技術(shù)（immunohistochemicaltechnique)范疇，后者則稱為免疫測定（immunoassay)。
首先被用作標(biāo)記免疫技術(shù)中標(biāo)記物的是熒光素。1941年Coons建立的熒光抗體技術(shù)（fluorescentantibodytechnique)使組織和細(xì)胞中抗原物質(zhì)的定位成為可能。放射性核素作為標(biāo)記物在免疫技術(shù)中的應(yīng)用又開創(chuàng)了特異性的超微量測定。1956年Yalow和Berson建立的放射免疫測定（radioimmunoassay，RIA)很快普遍應(yīng)用于體液中的激素、微量蛋白及藥物的測定。酶用作免疫技術(shù)標(biāo)記物是從抗原定位開始的。1966年Nakene和Pierce利用酶使底物顯色的作用而得到與熒光抗體技術(shù)相似的結(jié)果。70年代初，酶標(biāo)抗體技術(shù)開始應(yīng)用于免疫測定，其后得到迅速發(fā)展。
熒光抗體技術(shù)、放射免疫分析和酶免疫技術(shù)，即經(jīng)典的三大標(biāo)記技術(shù)，又可根據(jù)標(biāo)記物是否為放射性物質(zhì)分為放射性免疫測定和非放射性免疫測定兩大類。后者消除了應(yīng)用放射性物質(zhì)在測定中帶來的不便，受到使用者的歡迎，新的方法不斷出現(xiàn)�；瘜W(xué)發(fā)光免疫技術(shù)和金免疫技術(shù)等得到很大的發(fā)展。這些方法已普遍應(yīng)用于臨床檢測驗(yàn)。
酶免疫技術(shù)一般分成酶免疫組化技術(shù)和酶免疫測定兩大類。酶免疫組化技術(shù)與熒光抗體技術(shù)相似，酶標(biāo)記抗體與組織切片上的抗原起反應(yīng)，然后與酶底物作用，形成有色沉淀物，可以在普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如酶作用的產(chǎn)物電子密度發(fā)生一定的改變，則可用電子顯微鏡觀察，稱為酶免疫電鏡技術(shù)。
酶免疫測定根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合的與游離的酶標(biāo)記物而分為均相（homogenous)和異相（heterogenous)兩種類型，實(shí)際上所有的標(biāo)記免疫測定均可分成這兩類。如以標(biāo)記抗體檢測標(biāo)本中的抗原為例，按照簡單的形式是在試劑抗體過量的情況下進(jìn)行，其反應(yīng)式如下：
Ab*＋Ag→Ab*Ag＋Ab*
Ab*Ag代表結(jié)合的標(biāo)記物，Ab*為游離的標(biāo)記物。如在抗原反應(yīng)后，先把Ab*Ag與Ab*分離，然后測定Ab*Ag或Ab*中的標(biāo)記物的量，從而推算出標(biāo)本中的抗原量，這種方法稱為異相法。如在抗原抗體反應(yīng)后Ab*Ag中的標(biāo)記物*失去其特性，例如酶失去其活力，熒光物質(zhì)不顯熒光，則不需要進(jìn)行Ab*Ag與Ab*的分離，可以直接測定游離的Ab*量quanxiangyun.cn/shouyi/，從而推算出標(biāo)本中的Ag含量，這種方法稱為均相法。
在異相法中，抗原和抗體如在液體中反應(yīng)，分離游離和結(jié)合的標(biāo)記物的方法有好多種。與放射免疫測定相類似的液相異相酶免疫技測定，在某些激素等定量測定中也有應(yīng)用。但常用的酶免疫測定法為固相酶免疫測定。其特點(diǎn)是將抗原或抗體制成固相制劑，這樣在與標(biāo)本中抗體或抗原反應(yīng)后，只需經(jīng)過固相的洗滌，就可以達(dá)到抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)的分離，大大簡化了操作步驟。這種被稱為ELISA的檢測技術(shù)成為目前臨床檢驗(yàn)中應(yīng)用較廣的免疫測定方www.med126.com法。
綜上所述，酶免疫技術(shù)的分類可概括如圖15-1。
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圖15-1酶免疫技術(shù)的分類
