引子2006年1月21日，來自北京中日友好醫(yī)院的最新消息，中國人用禽流感疫苗臨床研究進展順利。截至目前，已有66名志愿者接種了試驗用疫苗，均未出現(xiàn)明顯不適反應。
疫苗的研制者之一北京科興生物制品有限公司表示，目前人用禽流感疫苗生產(chǎn)線已準備完畢。在疫苗完成全部臨床試驗后，或者在緊急情況下，經(jīng)國家有關部門批準，該生產(chǎn)線可立即投入生產(chǎn)。如果發(fā)現(xiàn)禽流感病毒的變異，也可在48天內(nèi)完成對病毒的改造，并在4個月內(nèi)研制出新的疫苗。
專家認為，這表明我國在人禽流感疫苗方面的科研水平已經(jīng)與全球一流水平同步。
關于這支疫苗的前世今生，故事則要從兩年前說起。
越南－香港－英國
2004年1月17日。香港Marken快遞公司——該公司以快遞高危醫(yī)藥和病毒物品而蜚聲業(yè)界。
靜靜的快遞大廳里，預備出貨的箱子一一排列，其中一箱的封紙上寫著，發(fā)件人地址：香港九龍南昌街三百八十二號。發(fā)件人：香港衛(wèi)生署林薇玲實驗室（Dr. Wilina WL.Lim)。
沒有幾個人知道這個箱子的特殊之處——一株致命H5N1病毒匿身其中。
病毒取自一位12歲的越南女孩，女孩已逝。
時值2004年前后，越南爆發(fā)高致病性禽流感，引發(fā)全球關注。
WHO（世界衛(wèi)生組織)共有四個流感合作中心（WHO Collaborating Centres for Influenza)，分別在美國、英國、澳大利亞和日本。當有緊急疫情爆發(fā)時，這些實驗室會協(xié)助WHO的全球工作。按照WHO的工作流程，當某地爆發(fā)流感疫情時，所在國的國家實驗室將前往取樣調(diào)查，并將取樣數(shù)據(jù)、某些時候也包括病毒樣本本身，提交給WHO四個流感合作中心之一。
WHO八大參考實驗室之一的林薇玲實驗室，地處香港，靠近越南，病毒就這樣從越南被取回香港。
林薇玲，1997年香港流感大流行時進行H5N1取樣和分離的主要專家，在控制傳染病和非傳染病方面成績卓著，曾被《新聞周刊》評為“21世紀女強人”。
這株剛剛殺死12歲越南女孩的病毒現(xiàn)在有了新的使命——為人類研制人禽流感疫苗作貢獻。
為此，WHO的專家已經(jīng)召開過遠程電話會議，討論是否需要對H5N1病毒的部分基因片斷進行修改，以提供更加安全的病毒樣本給疫苗生產(chǎn)商實驗。當時科學家們的意見不甚一致。
最終說服科學家們立即開始實驗的還是病毒自己。
“病毒已經(jīng)發(fā)生了變化，它與之前的H5N1的抗體反應都不同。”NIBSC的JohnWood博士依然清楚地記得當初的情形。
在一次電話會議后，科學家們準備開始行動：去掉H5N1基因鏈中高致病性的
氨基酸，降低H5N1的毒性，經(jīng)過重配后，再交與疫苗生產(chǎn)商實驗。
JohnWood博士告訴記者，當時具備科研能力能將越南女孩病毒樣本中高致病性病毒去除的機構只有兩個：英國的NIBSC和美國St. Jude Research Hospital，Dr. Robert Webster的實驗室。
美國實驗室已經(jīng)采用了另一個樣本進行實驗，制造了VNH5N1-PR8/CDC-RG禽流感疫苗生產(chǎn)用毒株，這也就是之后巴斯德公司用于生產(chǎn)并被美國政府采購的疫苗生產(chǎn)用毒株。為避免實驗的相同性，NIBSC則要求從林薇玲實驗室提取越南女孩的病毒樣本進行實驗。
我們的主角——一株令人聞名色變的H5N1病毒，現(xiàn)在該再次上路了。這可不是一般的快遞。
根據(jù)IATA（國際航空運輸協(xié)會，International Air Transport Association)的標準，快遞公司人員必須為病毒準備好能擰緊的有蓋小瓶，將其置于有干冰保護的泡沫箱中，再在外面套上一層泡沫防護箱。最外面的這個體積為0.5×0.5×0.5立方米的紙箱與常規(guī)的空運物品沒有區(qū)別。只是物品的外包裝上具名：高危險品，有傳染性。
快遞的包裝上還寫著：目的地：Blanche Lane，South Mimms， Potters Bar，Hertfordshire EN6 3QG United Kingdom（英國)。
收件人：NIBSC（National Institute for Biological Standards and Control. 國立生物制品標準和檢定研究所)， John Wood博士。
英國：病毒80日變身記
“那一天我們都在等待著病毒的到來�！�2004年1月19日，John Wood博士收到快遞。
病毒被直接送往NIBSC的P4實驗室。在這個有300名工作人員，其中200名科學家的工作中心，一共9名人員參加了此次實驗：其中3名科學家（Diane Major， Carolyn Nicholson，Jim Robertson)、4名技師和兩名高級科學家檢測實驗。其中一名高級科學家即是JohnWood博士。
“我們準備好了實驗室，檢驗了每一臺設備是否運作正常�！盌iane Major，這位在此實驗室流感小組工作28年的科學家在電話中回憶，正是她主要負責了病毒后期的安全測試。
這株可惡的病毒將在此經(jīng)受兩道處理流程：1.從高致病性禽流感病毒克隆出血凝素和神經(jīng)氨酸酶基因，并將其與其他基因重配產(chǎn)生新的毒種，該毒種必須不再具有高致病性并同時能在雞胚內(nèi)生存；2.檢驗新產(chǎn)生的毒種的安全性，必須對于人和環(huán)境都絕對安全。
來自越南女孩的這株H5N1與其他高致病性病毒一樣，屬于RNA型病毒。
科學家們先通過逆轉(zhuǎn)錄將RNA轉(zhuǎn)錄成DNA.獲得含有HA抗原和NA抗原的基因片段。其中的高致病性的基因即存在于HA抗原上。去掉其中4個氨基酸（3個
精氨酸，1個
賴氨酸)，并改變1個精氨酸為脯安酸之后，H5N1的高致病性便已去除。之后將含有HA抗原和NA抗原基因片段的質(zhì)粒與另外10個含有PR8基因片段的質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染VERO細胞，獲得了新的毒種。
現(xiàn)在，從香港過來的那株H5N1已經(jīng)被重配成了新的毒株，新毒株被命名為“NIBRG-14”。
接下來是檢驗“NIBRG-14”的過程。在確定新毒種是否安全之前，它不能離開NIBSC的P4實驗室。
Major博士和她的同事們，對新的毒種實施了三項實驗，實驗對象分別為：雞胚、小雞和雪貂。
第一個實驗將NIBRG-14病毒直接注射到雞胚中，三天后，發(fā)現(xiàn)雞胚仍然存活。這就說明，病毒能夠在雞胚中生長而且并不會殺死胚胎。這與之前在越南發(fā)現(xiàn)的H5N1原病毒在兩天內(nèi)就殺死胚胎的情形是完全不一樣的。
第二個實驗是將病毒原液注射到小雞的體內(nèi)。十天后觀察這些病毒是否有產(chǎn)生新的疾病或者是否讓小雞致死。十天后，小雞一切正常。
最后一個實驗是在雪貂身上。因為此種動物的流感發(fā)病機理與人類極其相似。如果這種病毒讓雪貂致命，那么毫無疑問對人同樣具有致命性。注射NIBRG－14之后，雪貂的任何器官都無發(fā)病現(xiàn)象。
新毒株看來經(jīng)受住了檢驗，是時候把它帶出P4實驗室，提供給疫苗生產(chǎn)商了。
John Wood博士介紹，接受病毒的公司并不必為此病毒付費，但必須簽署國際通用的“物質(zhì)轉(zhuǎn)讓協(xié)議”（MTA：Materials Transfer Agreement)。協(xié)議規(guī)定，疫苗生產(chǎn)商不得對實驗樣本進行科學的改造，只能在流感大流行時期才能使用，且所有實驗室必須具備WHO所要求的實驗規(guī)格。但實驗一旦用于商業(yè)性生產(chǎn)，生產(chǎn)商須支付第三方費用，具體數(shù)額尚待討論。
于是，距離H5N1病毒進入NIBSC實驗室80天后，病毒被重配為NIBRG-14，即將離開NIBSC的實驗室。
2004年4月8日之后，NIBRG-14們被發(fā)送往全球14個國家的50個實驗室，其中有6家中國實驗室。
中國70天：從“NIBRG-14”到疫苗
浙江天元生物藥業(yè)股份有限公司的陳先生記得他遇到John Wood博士是2005年2月，在WHO的會議上�！爱敃r他提到他們有這樣一種疫苗病毒種樣本，我們就向他申請索取。”這位在公司負責科研開發(fā)與品質(zhì)管理的負責人告訴記者。
NIBRG-14到達杭州的時間是2005年的8月。它靜靜地躺在天元生物的實驗室里。
“HA和NA的基因序列告訴我們，它仍然是H5N1.”陳說，我們一拿到該毒種就馬上開始試驗工作。
根據(jù)病毒學原理，純化后的病毒注射到人體內(nèi)，因其高致病性氨基酸已經(jīng)去除，因此不具備致病性；但這種病毒到達人體內(nèi)后，人體會自動產(chǎn)生抗體�？v使抗體在人體內(nèi)滴度逐漸遞減，也會在人體再次遇到H5N1時，激活其記憶功能，產(chǎn)生抗體。
“我們要做的是一個病毒在雞胚細胞上適應生長、制備病毒、病毒純化、試制疫苗并檢驗的過程�！标惤忉�。
生產(chǎn)疫苗用的載體是雞胚。將毒種直接用注射器接種到孵化9到10天左右的雞胚尿囊腔中，利用其中的尿囊液進行生長。
48小時到72小時之后，收獲尿囊腔中的病毒液。收獲之后進行“滅活”工作，用甲醛滅活毒種。
接下來“超濾濃縮”，即過濾去除大部分水和部分雜物，留下病毒。
然后是“超速離心”，將病毒顆粒再一次純化，只保留病毒顆粒。然后在病毒顆粒懸液中加入Triton X-100或者Triton N-101，去除病毒顆粒上的脂蛋白（脂蛋白在病毒疫苗中有副作用)。
去掉之后再次“超濾”，去掉Triton.隨后通過“凝膠層析”進一步純化，保留病毒顆粒。
最后出來的溶液即可以配制成疫苗。臨床一般配制成為每人份15微克。裝在西林瓶或者預灌裝注射器中。經(jīng)過質(zhì)量檢定、貼上標簽、包裝，即成為成型的疫苗。
經(jīng)過如此一系列復雜的流程，在70天左右，英國來客NIBRG-14在杭州變成了防止H5N1禽流感侵襲的疫苗。
天元公司生產(chǎn)出第一支疫苗的時間在2005年10月12日。
與此同時，在中國的另外一個公司也是在用同樣的毒本試制全病毒疫苗。2005年11月14日，北京科興公司“人用禽流感疫苗研制”獲得中國科技部驗收成功。
2006年1月21日，已有66名志愿者接種了試驗用疫苗，均未出現(xiàn)明顯不適反應。
而現(xiàn)在科學家們的擔心是，如果流感大規(guī)模流行，疫苗是否有足夠的儲備量？
－－－－－－－－－－－請問一下各位同道,國內(nèi)有沒有類似于像上帖說到的那家香港Marken快遞公司那樣,專門運遞藥品或者藥水,醫(yī)療用品的郵遞公司?
望知道的同道能在此帖給予回復!謝謝!
