豬圓環(huán)病毒2型感染的
流行病學(xué)調(diào)查
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豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus，PCV)屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬的成員，根據(jù)抗原性及基因組成，分為PCVl和PCV2兩種，其中PCV2對豬具有致病性，于1998年首次從患斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征(post-weaning multisystemic wasting syndrome，PM-WS)的病豬體內(nèi)分離出來。近年來，豬圓環(huán)病毒病的發(fā)生呈上升趨勢，加拿大、美國、法國、英國等國家都報(bào)道了PMWS的發(fā)生和流行，國內(nèi)也不斷有關(guān)于PCV2以及與其他病原體混合感染的報(bào)道。PCV2主要侵害免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致感染豬免疫抑制，降低機(jī)體對其他病原體的抵抗力和疫苗的反應(yīng)性，容易導(dǎo)致其他病毒和細(xì)菌的繼發(fā)感染，使死亡率明顯升高，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為了解該病在河北省尤其冀東地區(qū)及其臨壤京津地區(qū)的流行情況，在2006年9月至2007年10月期間，采用間接ELISA方法對遷安、灤南、撫寧、廊坊、寧河、大興等9個(gè)縣(市)的22個(gè)豬場的398份
豬血清檢測了PCV2抗體并進(jìn)行了分析，同時(shí)用PCR方法對部分樣品進(jìn)行了病原學(xué)檢測。1材料與方法1．1待檢血清樣品樣品采自冀東、北京、天津部分地區(qū)的11個(gè)規(guī)模豬場和ll個(gè)散養(yǎng)戶，共采集血清398份，其中繁殖母豬、后備母豬86份，種公豬17份，育肥豬149份，斷奶仔豬146份。耳靜脈或前腔靜脈采血，分離血清，-20℃保存?zhèn)溆谩?．2主要試劑豬圓環(huán)病毒病ELISA診斷試劑盒，購自華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院動(dòng)物病毒研究室；蛋白酶K，購自Merck公司；Tris飽和酚，購自鼎國生物技術(shù)公司；Taq DNA聚合酶、dNTPs等購自北京天為時(shí)代科技有限公司。1．3 引物上游引物U：5 ’-AGT GAG CGG GAA AAT GCAGA-3’，下游引物L(fēng)：5’-TCC TCC GTG GAT TGT TCTGT-3 ’，由上海生工生物技術(shù)有限公司合成。1．4血清抗體的ELISA檢測按照豬圓環(huán)病毒病間接ELISA檢測試劑盒說明進(jìn)行抗體檢測。1．5血清樣品中PCV2核酸的PCR檢測1．5．1 DNA的提取從ELISA檢測陽性的血清樣品中隨機(jī)取14份用于PCV2 DNA提取。DNA提取過程如下：取300μL血清，加入等體積的組織裂解緩沖液，再加入蛋白酶K(20 mg／mL)至終濃度50μg／mL，于50℃消化2 h；取出消化產(chǎn)物，加入等體積的Tris飽和酚，充分振蕩混勻后，4℃12 000 r／min，離心10 min；取上層水相500 μL轉(zhuǎn)入l支1．5 mL Eppendorf管中，加入等體積的酚．氯仿．異戊醇混合液，混勻后，4℃12 000 r／min，離心10 min；取上層水相400 μL轉(zhuǎn)入另1支1．5 mL Eppendorf管中，加入800μL預(yù)冷無水
乙醇和3 mol／L NaAc(pH 5．2)40斗L，在一20℃放置l—2 h或室溫放置30 min以沉淀病毒DNA；4 ℃ l2 000 r／min，離心10 min，棄去上清，用70％乙醇洗滌沉淀，自然干燥后溶于20汕滅菌蒸餾水中，立即用于PCR反應(yīng)或一20℃保存?zhèn)溆谩?．5．2 PCR擴(kuò)增PCR反應(yīng)體系為50μL，包括10×PCR緩沖液5μL，10 mmol／L dNTPs 4μL，5 U／μL Taq DNA聚合酶lμL，25 pmol／L上、下游引物各1 μL；DNA模板3μL，無菌去離子水38μ L。PCR擴(kuò)增條件為94℃預(yù)變性3 min；94℃變性45 S，56 ℃退火45 s，72℃延伸45 s，32個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸l0min。DNA產(chǎn)物用1．2％瓊脂糖凝膠電泳檢測。
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用疫苗預(yù)防
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做好疫苗接種
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