火雞出血性腸炎的防治,火雞出血性腸炎診治技術(shù)
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1.病原學(xué) HEV屬于腺病毒科成員，DNA病毒。通過(guò)電子顯微鏡觀察超薄組織切片，發(fā)現(xiàn)HE病毒粒子無(wú)囊膜，呈20面體立體對(duì)稱，總殼粒數(shù)為252個(gè)，呈空的和致密的兩種形態(tài)。它們?cè)诩?xì)胞核內(nèi)不規(guī)則聚集或呈晶格排列，在每個(gè)頂點(diǎn)上僅有一根五鄰體纖絲。HEV由11種不同的結(jié)構(gòu)多肽組成，分子質(zhì)量在14～97kD及9.5～96kD之間，其中的6種已被進(jìn)一步鑒定。病毒粒子直徑為70～90納米不等，在蔗糖密度梯度研究中，HEV的浮力密度為1.34克/毫升。 HEV抵抗力較強(qiáng)。70℃加熱1小時(shí)，37℃或25℃下干燥1周，或用0.0086%次氯酸鈉，1.0%十二烷基磺酸鈉，0.4%氯殺螨，0.4%Phenocide，0.4%Wescodyne，或1.0%來(lái)蘇兒處理，均可破壞HEV的感染性。 2.
流行病學(xué) （1)自然和實(shí)驗(yàn)宿主 火雞、
雉雞和雞是僅知的HEV及其關(guān)病毒的自然宿主。
珍珠雞和
鸚鵡也可能被自然感染。關(guān)于野禽，對(duì)42種禽類的血清學(xué)調(diào)查表明，除雞形目以外未發(fā)現(xiàn)感染的證據(jù)。甚至野生的雞形目成員（例如火雞)，似乎是由于其躲避天性，感染的危險(xiǎn)很小。當(dāng)火雞和雉雞感染時(shí)，似乎宿主的遺傳性影響臨床發(fā)病和病變形成的嚴(yán)重程度。 試驗(yàn)表明，火雞的HEV分離物能感染雉雞。用HEV實(shí)驗(yàn)感染雞形目的其他禽種（包括金黃色雉雞、孔
雀、雞、北美鶉和石雞)，可以產(chǎn)生病變。但在自然宿主以外的禽種上還沒(méi)有死亡的報(bào)道。 （2)宿主的易感齡期 在疫情報(bào)道中，HE發(fā)生于6～11周齡的火雞。最近的野外觀察表明更傾于感染7～9周齡的禽。僅有個(gè)別2周齡禽自發(fā)感染HEV的病例被報(bào)道，人們認(rèn)為是由于缺乏母源抗體而引起的。通常認(rèn)為4周齡以下的雛火雞很難感染HEV，是由于母源抗體的存在。有資料報(bào)道，在一定條件下，母源抗體可以持續(xù)到6周齡。最近對(duì)孵化24天的SPF火雞胚成功地進(jìn)行感染似乎推翻了這種說(shuō)法。在缺乏母源抗體時(shí)，雛火雞是易感的。但已報(bào)道13日齡和更小一些的雛火雞在缺乏母源抗體的情況下對(duì)HEV的感染具有抵抗力，表明所需要的某些種類的靶細(xì)胞還沒(méi)有成熟。 3.傳播途徑 HEV可以通過(guò)感染性糞便經(jīng)口腔或泄殖腔途徑接種易感火雞進(jìn)行傳播。病毒在濕潤(rùn)的各種尸體中或感染性糞便的懸浮液中可保持感染性達(dá)數(shù)周。在污染的墊料中已發(fā)現(xiàn)HEV，而且在那些以前發(fā)過(guò)該病的房舍中可以再次發(fā)病。還沒(méi)有通過(guò)蛋傳播的流行病學(xué)證據(jù)。在HEV的傳播中，除了機(jī)械媒介之外，還沒(méi)有牽涉到其他攜帶者和媒介。 4.臨診癥狀 臨診癥狀在24小時(shí)內(nèi)快速出現(xiàn)是HE的特征。這些癥狀包括沉郁、血便和死亡。在瀕死和死亡禽肛門(mén)周圍的皮膚和羽毛上常含有血糞便。如果在這些雞的腹部稍加壓力可從肛門(mén)擠出相同的血便。 5.發(fā)病率和死亡率 在野外發(fā)生的疫情，幾乎所有的禽都被感染，而且對(duì)實(shí)驗(yàn)性攻擊具有抵抗力。在臨床上受感染精神沉郁的小火雞，通常在24小時(shí)內(nèi)死亡，或完全恢復(fù)。野外的死亡率范圍從低于1%到略高于60%，平均大約為10%～15%。在實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)100%受到感染時(shí)，常出現(xiàn)80%的死亡率。 6.病理變化 （1)眼觀病變 死亡的小火雞通常因失血而外觀蒼白，但其生長(zhǎng)良好，且嗉囔中含有飼料。小腸通常擴(kuò)張，極度變色，腸腔內(nèi)充滿血性滲出物。腸黏膜充血，個(gè)別火雞黏膜表面覆蓋有黃色、壞死性纖維素膜。病變通常在近側(cè)小腸更明顯，但在較嚴(yán)重的病例也常擴(kuò)散到遠(yuǎn)端。感染禽的脾臟特征性腫大、質(zhì)脆，呈大
理石或斑駁樣。然而，那些死亡雞只的脾臟往往可能因失血隨后收縮導(dǎo)致變得更小。肺也可能充血，但其他的器官呈蒼白色。據(jù)報(bào)道，死亡火
雞肝臟腫大，不同組織均有點(diǎn)狀出血，但這些病變很不一致，因而不具有診斷價(jià)值。 （2)顯微病變 特征性HE的病理學(xué)變化大多見(jiàn)于淋巴網(wǎng)狀系統(tǒng)和胃腸道系統(tǒng)。死亡時(shí)的脾臟病變包括白髓增生、淋巴樣壞死和淋巴網(wǎng)狀細(xì)胞的核內(nèi)包涵體。早在HEV感染后的第3天，脾髓面周圍可見(jiàn)明顯的白髓增生，這導(dǎo)致在感染后的4～5天，肉眼可見(jiàn)斑駁樣且不規(guī)則的白髓融合島。在感染后3～5天，經(jīng)HE和免疫酶、過(guò)氧化酶染色，在這些區(qū)域可見(jiàn)大量的核內(nèi)包涵體。從形態(tài)上看，這些細(xì)胞呈淋巴樣。同樣，脾臟的單核巨噬細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)有核內(nèi)包涵體。到感染后的4～5天，白髓開(kāi)始出現(xiàn)壞死。到感染后6～7天，已全部擴(kuò)散，僅在紅髓處偶爾見(jiàn)到一些漿細(xì)胞。在感染后3～9天，除了脾臟的變化外，在胸腺的皮質(zhì)和髓質(zhì)部及法氏囊，也可見(jiàn)淋巴樣衰竭。 胃腸道典型病變包括腸黏膜嚴(yán)重充血，絨毛上皮細(xì)胞變性、脫落及腸絨毛頂端出血。由于固有層的血管是完整的，紅細(xì)胞通過(guò)血細(xì)胞滲出而移出血管外，因此，與其說(shuō)是由內(nèi)皮細(xì)胞破壞不如說(shuō)是崩解導(dǎo)致出血。除乳頭細(xì)胞、漿細(xì)胞和異嗜細(xì)胞外，還在固有層發(fā)現(xiàn)了大量含核內(nèi)包涵體的網(wǎng)狀淋巴細(xì)胞。這些組織病理學(xué)變化在十二指腸后段到胰導(dǎo)管處最明顯。但腺胃、肌胃、小腸、
盲腸、盲腸扁
桃體和法氏囊中與此相似，但病變程度稍低。 另外，在肝臟、骨髓、外周血液白細(xì)胞、
肺臟、胰腺、腦和腎小管上皮細(xì)胞中也可觀察到含有HEV核內(nèi)包涵體的細(xì)胞。 7.診斷 （1)病毒的分離與鑒定 從死亡或?yàn)l死小火雞的出血性腸內(nèi)容物或脾組織可以發(fā)現(xiàn)大量的HEV。HE血清學(xué)陰性的火雞，最好是6周齡的小火雞，采用腸內(nèi)容物經(jīng)口接種，或用搗碎脾臟的生理鹽水粗提物經(jīng)口服接種或靜脈注射接種。靜脈注射強(qiáng)毒分離物后3天和經(jīng)口服接種后5～6天常發(fā)生死亡。那些未死亡的小火雞，脾臟含大量的病毒，通常表現(xiàn)腫脹，呈大理石樣。這時(shí)采集的血清內(nèi)也含有病毒。此外還可以采用成淋巴細(xì)胞樣的火雞源B細(xì)胞傳代系（MDTC-RP19)用作體外分離和培養(yǎng)HEV。 通常采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP)方法來(lái)鑒定HEV及其相關(guān)病毒。將脾組織（新鮮的或冷凍的)用生理鹽水1∶1稀釋，加入多克隆的抗HEV血清。采用免疫熒光和免疫過(guò)氧化物酶法可以檢測(cè)冰凍或福爾馬林固定組織中的病毒抗原。近來(lái)隨著基因組序列數(shù)據(jù)庫(kù)，的建立，已經(jīng)可允許采用標(biāo)準(zhǔn)PCR以及巢式PCR檢測(cè)新鮮或冰凍組織及組織抽提物中的病毒DNA。由于PCR的應(yīng)用，脾臟原材料或DNA提取物在濾紙上干燥可以用于保存。此外，不常用的檢測(cè)技術(shù)；包括抗原捕獲ELISA、原位DNA雜交和限制性核酸內(nèi)切酶指紋技術(shù)。 （2)血清學(xué)診斷 感染HEV后2～3周康復(fù)禽的血漿或血清中，采用AGP法可以檢測(cè)到HEV抗體。如果是依據(jù)血清學(xué)作出診斷，最好是檢測(cè)急性期和恢復(fù)期的血清。采用AGP法可以險(xiǎn)測(cè)到母源抗體，但這種方法一般對(duì)1周齡以后的禽敏感性較低。更敏感的ELISA方法已能夠檢測(cè)和定量HEV抗體。盡管多數(shù)禽類到3周齡時(shí)的血清反應(yīng)仍呈陰性，但約4～6周齡時(shí)，這種方法就能夠檢測(cè)出火雞中的母源抗體。抗體最早在靜脈注射接種后3天就能檢測(cè)出來(lái)。 （3)鑒別診斷 在火雞中，如果出現(xiàn)大理石樣腫脹的脾臟，用AGP法不能證明有HEV抗原，而又缺少腸道出血現(xiàn)象，則應(yīng)考慮網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥或淋巴增生性疾病。在火雞，增大而充血的脾臟常被誤認(rèn)為HEV所致，但多數(shù)是細(xì)菌性
敗血癥（如大腸桿菌病、沙門(mén)氏桿菌病、
丹毒)所造成的結(jié)果。胃腸出血和黏膜充血可能與急性敗血癥、病
毒血癥或毒血癥有關(guān)。但這些很少能被觀察到，因?yàn)闆](méi)有其他與病因?qū)W相一致的病變或癥狀。此外，也應(yīng)考慮到寄生蟲(chóng)病如球蟲(chóng)病和毒性物質(zhì)（如重金屬和化學(xué)物質(zhì))。 8.防治 （1)管理措施 感染性墊料和糞便是最普遍的傳播媒介，所以首先要采取良好的生物安全措施來(lái)預(yù)防和控制疾病。用0.0086%次氯酸鈉溶液或其他殺病毒制劑，包括酚類衍生物，輔以25℃干燥1周可以清潔和消毒污染了的設(shè)施。但在大多數(shù)商品雞群中，尤其是那些雞齡層次多的雞場(chǎng)，要想對(duì)病毒進(jìn)行全面殺滅是不切實(shí)際的。在這種情況下，接種疫苗是控制和預(yù)防臨床發(fā)病的最可行辦法。 （2)疫苗 HEV的無(wú)毒力病毒分離物已經(jīng)成功地被制成飲水型活疫苗。目前有兩種疫苗被廣泛使用：一種是接種了無(wú)毒力HEVⅠ（MSD毒株)或HEVⅡ（源于火雞)的4～6周齡火雞的脾臟制成的粗勻漿；另一種是在體外用MDTC-RP19傳代細(xì)胞系懸浮培養(yǎng)生產(chǎn)的。這兩種疫苗好像都能產(chǎn)生足夠的血清抗體和免疫保護(hù)，并在美國(guó)廣泛使用。但只有后一種疫苗能買到。外周血液白細(xì)胞中增殖無(wú)毒力病毒的第三種疫苗生產(chǎn)方法也已有報(bào)道，并已在加拿大投入使用。其他疫苗，包括一種純化的亞單位殼粒苗及基因工程苗、重組苗均在研制中。最初用禽痘病毒表達(dá)HEV殼粒蛋白的重組疫苗來(lái)減少火雞死亡率和嚴(yán)重的腸道病變。通過(guò)試驗(yàn)證實(shí)，重組疫苗可以減少免疫抑制。重組HEV纖絲蛋白基因轉(zhuǎn)基因植物正作為一種疫苗的模式被研制。 近來(lái)已經(jīng)報(bào)道了SPF火雞的OVO疫苗，3.5～6周齡間的健康火雞常用飲水疫苗。水中增加疫苗穩(wěn)定劑（例如奶粉)，消除任何消毒劑，包括水中的氯，這些對(duì)疫苗毒的存活和免疫的成功都非常必要。首次免疫實(shí)驗(yàn)雞群的免疫保護(hù)率低于100%，它是通過(guò)以后2～3周后續(xù)的傳染而獲得保護(hù)的。盡管如此，二次免疫也僅是偶爾應(yīng)用。 （3)治療：HE疫情爆發(fā)后剛出現(xiàn)癥狀時(shí)，可采用恢復(fù)期雞群的抗血清0.5～1.0毫升/只進(jìn)行皮下或肌肉注射治療。 由于這些病毒能使機(jī)體產(chǎn)生免疫抑制，因此，一定要考慮對(duì)繼發(fā)細(xì)菌感染的治療，主要是大腸桿菌病。依據(jù)細(xì)菌培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn)來(lái)選擇一種適宜的抗生素。在商業(yè)化火雞生產(chǎn)中，運(yùn)用合理的管理措施，對(duì)暴露在野外的火雞接種可以加劇本病的其他病原的疫苗（例如，Bordetella avium，NDV)，這些都不能被忽視。
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