四、血紅蛋白含量測定
血紅蛋白(Hemoglobin,簡稱Hb)測定方法很多,最常用的是沙利(S9hU)氏目視比色法,雖然精確度有一定誤差,但方法簡便快速,目前仍被獸醫(yī)臨床廣泛應(yīng)用。
(一)原理紅細(xì)胞遇酸溶解,釋出血紅蛋白,并被酸化成褐色的酸性血紅素;稀釋后與標(biāo)準(zhǔn)色柱比色,即可測定每100m1血液中血紅蛋白的克數(shù)或百分?jǐn)?shù)。
(二)器械和試劑
1.器械。沙利氏血紅蛋白計一套(內(nèi)有測定管一支,裝有標(biāo)準(zhǔn)褐色玻璃比色板的比色座一個,刻有10mm3和20mm3容積的吸血管一支),在測定管上有兩種刻度,從下往上,一側(cè)有2—24的刻度,表示
100ml冉液中所含血紅蛋白克數(shù),另一側(cè)有20—160的刻度,表示100ml血液中血紅蛋白的百分?jǐn)?shù)。國產(chǎn)的血紅蛋白計是以每100m1血液含14.5g血紅蛋白為100%而設(shè)制。
2.試劑。1/10m01/L鹽酸(亦可用1%鹽酸代替)。取濃鹽酸8.5m1于1000ml容量瓶中,然后加蒸餾水至刻度。
(三)方法于測定管內(nèi)加l/10m01/L鹽酸至刻度“2”處。
用吸血管吸抗凝血(或耳尖血)至刻度20mm*處,擦凈管外壁的血跡,將血液吹入測定管的鹽酸液中,再吸取上清的鹽酸液至刻度處反復(fù)洗滌數(shù)次,輕輕搖動測定管(或用玻棒攪拌),使血液與鹽酸混合,
靜置10min。
慢慢沿測定管壁逐滴加入蒸餾水(或1/lOmol/L鹽酸),邊加邊混勻,邊觀察,直至液體顏色與標(biāo)準(zhǔn)色柱一致時為止。
讀取測定管內(nèi)液體凹面的刻度數(shù),即為100m1血液中血紅蛋白的克數(shù)或百分?jǐn)?shù)。
(四)注意事項要注意保持血紅蛋白計原套用具,不要隨意掉換。抗凝血要搖勻,吸血要準(zhǔn)。不要向測定管中用力吹吸,以防產(chǎn)生氣泡,萬一產(chǎn)生了氣泡,可用小玻棒沾少量95%酒精,然后接觸氣泡,即可消除。靜置時間以10min為準(zhǔn),杏則結(jié)果可能偏高或偏低。為使結(jié)果更為準(zhǔn)確,在讀數(shù)后再加蒸恤水1滴,然后讀數(shù),如液體色澤變淡,以前一次的讀數(shù)為準(zhǔn),如液體色澤不變淡,則以后一次的讀數(shù)為
準(zhǔn)。
(五)正常參考值