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抗HSV感染和鎮(zhèn)痛的人甲硫氨酸腦啡肽干擾素α-m融合蛋白制劑

公開(公告)號 CN1431018A  
公開(公告)日 2003.07.23  
申請(專利)號 CN02100320.3  
申請日期 2002.01.10  
專利名稱 抗HSV感染和鎮(zhèn)痛的人甲硫酸腦啡肽干擾素α-m融合蛋白制劑  
主分類號 A61K38/21  
分類號 A61K38/21;A61K38/17;C12N15/09;C12N15/63;A61P31/12  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 北京東康龍病毒生物技術(shù)工程研究中心  
發(fā)明(設(shè)計)人 呂宏亮;侯云德;衣作安;李武平;黎孟楓  
地址 100052北京市宣武區(qū)迎新街100號基因室301號  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構(gòu)  
代理人  
國省代碼 北京;11  
主權(quán)項 一種外用制劑,它含有作為有效成份的基因工程20千道爾頓人甲硫氨酸腦啡肽干擾素α-m融合蛋白和藥物學上可接受的載體或稀釋劑。其特征在于:a 一種人甲硫氨酸腦啡肽-干擾素αm融合蛋白的制法,采用人工設(shè)計、化學合成的人IFNαm基因,并用Over-lapping PCR技術(shù)搭建克隆甲硫氨酸腦啡肽干擾素αm融合蛋白基因,其結(jié)構(gòu)式如下:TACGGTGGTTTCATGTCTGGTTCTTGTGATCTGCCGGAAACCCACTCTCTAGACAACCGTCGTACCCTGATGCTGCTGGCTCAGATGTCTCGTATCTCTCCGTCTTCTTGCCTGGACCCGCGTCACGACTTCGGTTTCCCGCAGGAAGAATTTGACGGTAACCAGTTCCAGAAAGCTCCGGCTATCTCTGTTCTGCACGAACTGATCCAGCAGATCTTCAACCTGTTCACCACCAAAGACTCTTCTGCTGCTTGGGACGAAGACCTGCTGGACAAATTCGACACCGAACTGTACCAGCAGCTGAACGACCTGGAAGCTTGTGTTATGCAGGAAGAACGTGTTGGTGAAACCCCGCTGATGAACGCTGACTCTATCCTGGCTGTTAAGAAATACTTCCGTCGTATCACCCTGTACCTGACCGAAAAGAAATACTCTCCGTGTGCTTGGGAAGTTGTTCGTGCTGAAATCATGCGTTCTCTGTCTCTGTCTACCAACCTGCAGGAACGTCTGCGTCGTAAAGAA人干擾素αm由166個氨基酸組成,甲硫氨酸腦啡肽由5個氨基酸組成,甲硫氨酸腦啡肽在人干擾素αm的N端通過連接子Ser-Gly-Ser進行融合,總計522bp。5’和3’克隆構(gòu)建時,加起始密碼子和終止密碼子,以及EcoRI、PstI的酶切位點。從基因的人工設(shè)計、合成到搭建克隆,由于采用了大腸桿菌的偏愛密碼子,構(gòu)建的融合基因能夠在大腸桿菌中高效表達,產(chǎn)生大量的融合蛋白,而且其氨基酸序列沒有改變。b 其中基因工程20千道爾頓人甲硫氨酸腦啡肽干擾素α-m融合蛋白具有SEQ ID No:2的氨基酸序列,結(jié)構(gòu)式如下:TyrGlyGlyPheMetSerGlySerCysAspLeuProGluThrHisSerLeuAspAsnArgArgThrLeuMetLeuLeuAlaGlnMetSerArgIleSerProSerSerCysLeuAspProArgHisAspPheGlyPheProGlnGluGluPheAspGlyAsnGlnPheGlnLysAlaProAlaIleSerValLeuHisGluLeuIleGlnGlnIlePheAsnLeuPheThrThrLysAspSerSerAlaAlaTrpAspGluAspLeuLeuAspLysPheAspThrGluLeuTyrGlnGlnLeuAsnAspLeuGluAlaCysValMetGlnGluGluArgValGlyGluThrProLeuMetAsnAlaAspSerIleLeuAlaValLysLysTyrPheArgArgIleThrLeuTyrLeuThrGluLysLysTyrSerProCysAlaTrpGluValValArgAlaGluIleMetArgSerLeuSerLeuSerThrAsnLeuGlnGluArgLeuArgArgLysGlu  
摘要 采用人工設(shè)計、化學合成、Over-lapping PCR、蛋白質(zhì)變性、復性、純化等技術(shù),發(fā)明了具有較高抗病毒活性和外周鎮(zhèn)痛作用的甲硫氨酸腦啡肽干擾素α-m融合蛋白。融合蛋白(Enk-Met-IFNα-m,EI)可以作為藥物的活性組分制成不同的劑型外用,可治療HSV-1、HSV-2感染引起的單純皰疹,又能起到鎮(zhèn)痛的作用。這種以人甲硫氨酸腦啡肽干擾素α-m融合蛋白為活性成分的制劑,最主要的用途包括:制成滴眼液,可用于治療HSV-1感染引起的眼疾;作為涂抹劑,可用于HSV-2感染引起的生殖器皰疹;作為外用鎮(zhèn)痛劑,可治療皮膚灼傷、炎癥反應(yīng)引起的疼痛。  
國際公布  
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