| 公開(公告)號 | CN1490330A |
| 公開(公告)日 | 2004.04.21 |
| 申請(專利)號 | CN02137521.6 |
| 申請日期 | 2002.10.18 |
| 專利名稱 | 醋酸奧曲肽生產(chǎn)工藝 |
| 主分類號 | C07K7/64 |
| 分類號 | C07K7/64 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 上海子能高科股份有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 周逸明 |
| 地址 | 201908上海市寶山區(qū)羅店鎮(zhèn)羅太路810號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 上海世貿(mào)專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 葉克英 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項 | 醋酸奧曲肽生產(chǎn)工藝，其特征在于：由下列工藝步驟組成，(1)取Boc-Thr(Ac)-Wang樹脂(1.01mmol/g，1.01mmol)裝入反應(yīng)容器中，用DMF浸泡，洗滌，加入TFA與二氯甲烷的混合液，25℃反應(yīng)半小時，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，加三乙胺與二氯甲烷混合液，25℃反應(yīng)十分鐘，分別用DMF，二氯甲烷各洗滌三次，抽干，加入Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，25℃反應(yīng)一小時，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(2)述試劑卡氏法檢測氨基為陽性的，用接肽試劑補接后重復(fù)用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干至卡氏法檢測氨基為陰性，加入封頭試劑，25℃反應(yīng)一小時，用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，加入脫帽試劑，25℃反應(yīng)十二分鐘，用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(3)在上述脫帽反應(yīng)后的樹脂中，加Fmoc-Thr(tBu)-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，25℃反應(yīng)一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(4)在上述脫帽反應(yīng)后的樹脂中，加Fmoc-Lys(Boc)-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，25℃反應(yīng)一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(5)在上述脫帽反應(yīng)后的樹脂中，加Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，25℃反應(yīng)一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(6)在上述脫帽反應(yīng)后的樹脂中，加Fmoc-Phe-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，25℃反應(yīng)一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(7)在上述脫帽反應(yīng)后的樹脂中，加Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，25℃反應(yīng)一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(8)在上述脫帽反應(yīng)后的樹脂中，加Fmoc-D-Phe-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，25℃反應(yīng)一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，放入真空干燥器中干燥，得八肽樹脂，(9)將八肽樹脂轉(zhuǎn)移到茄形瓶中，冷卻下加入脫側(cè)鏈試劑，25℃攪拌二小時，抽干，二氯甲烷，DMF，無水乙醇各洗滌三次，抽干，NHOH(10)取步驟(9)的八肽樹脂轉(zhuǎn)移到茄形瓶中，加入50％的乙醇，25℃攪拌在一小時內(nèi)滴加硼氫化鈉和乙醇溶液，25℃攪拌四小時后過濾，用50％的乙醇分次洗滌，再將濾液和洗滌合并，加醋酸至PH值得7，40℃下減壓濃縮，(11)在上述濃縮液中加水，攪拌中滴加氨水至PH值7.8，室溫空氣中氧24小時，用冰醋酸調(diào)至PH值5.5，加活性碳攪拌30分鐘后過濾，(12)濾液分批經(jīng)純化后凍干得白色疏松塊狀成品，上述英文縮寫表：Boc-Thr(Ac)-Wang樹脂 叔丁氧羰酰-蘇氨酸(乙酰基)王樹脂TFA 三氟乙酸DMF 二甲基甲酰胺TBTU 氧-(1氫-苯并三氮唑基)-四甲基脲-四氟化硼HOBt 1-羥基苯并三氮Fmoc-Cys(Trt)-OH 芴甲氧羰基-半胱氨酸(三苯甲基)Fmoc-Thr(tBu)-OH 芴甲氧羰基-蘇氨酸(叔丁基)Fmoc-Lys(Boc)-OH 芴甲氧羰基-賴氨酸(叔丁氧 酰)Fmoc-D-Trp(Boc)-OH 芴甲氧羰基-D-型-色氨酸(叔丁氧 酰)Fmoc-Phe-OH 芴甲氧羰基-苯丙氨酸Fmoc-D-Phe-OH 芴甲氧羰基-D-型苯丙氨酸 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種醋酸奧曲肽生產(chǎn)工藝，其特征在于：由下列工藝步驟組成，取Boc-Thr(Ac)-Wang樹脂裝入反應(yīng)容器中，加入TFA與二氯甲烷的混合液反應(yīng)，洗滌后加三乙胺與二氯甲烷混合液反應(yīng)，加入Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，卡氏法檢測氨基為陽性用接肽試劑補接后至卡氏法檢測氨基為陰性，加入封頭試劑、脫帽試劑，洗滌，加Fmoc-Thr(tBu)-OH，TBTU，HOBt，加Fmoc-Lys(Boc)-OH，TBTU，HOBt，溶解，加Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，TBTU，HOBt，接肽試劑溶解，加Fmoc-Phe-OH，TBTU，HOBt，加入反應(yīng)容器，洗滌抽干，加Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU，HOBt，加Fmoc-D-Phe-OH，TBTU，HOBt，干燥得八肽樹脂，八肽樹脂中加入脫側(cè)鏈試劑，乙醇，硼氫化鈉和乙醇溶液，乙醇洗滌，加醋酸及滴加NHOH至pH值7.8，用冰醋酸調(diào)至pH值5.5，濾液分批經(jīng)純化后凍干得白色疏松塊狀成品。本發(fā)明的優(yōu)點利用硼氫化鈉還原取代價格昂貴的L-Thr(ol)，可大大降低醋酸奧曲肽生產(chǎn)合成的成本。 |
| 國際公布 |
