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單克隆抗體雙段和單段的制備方法

公開(公告)號 CN1136317C  
公開(公告)日 2004.01.28  
申請(專利)號 CN99115730.3  
申請日期 1999.03.12  
專利名稱 單克隆抗體雙段和單段的制備方法  
主分類號 C12P21/02  
分類號 C12P21/02  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 米力;陳志南;馮強(qiáng);余曉玲  
地址 710032 陜西省西安市長樂西路17號  
頒證日 2004.01.28  
國際申請  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 西安通大專利代理有限責(zé)任公司  
代理人 李鄭建  
國省代碼 陜西;61  
主權(quán)項(xiàng) 單克隆抗體雙段和單段的制備方法,其特征是:單克隆抗體腹水,用50%的飽和硫酸胺粗提二次,抗體蛋白沉淀物用0.1M檸檬酸緩沖液(PH3.5)充分溶解后,調(diào)正濃度為10-20mg/ml,再離心去除不溶物;F(ab’)2制備用蛋白酶與IgG酶切比例為1∶100,37℃反應(yīng)2-3h,用3M Tris調(diào)正PH7左右,以終止反應(yīng);Fab用木瓜蛋白酶,酶與IgG的比例1∶100,37℃反應(yīng)1-2h,0.25%(W/V)碘乙酰胺終止反應(yīng);HPLC疏水液相色譜法純化F(ab’)2,F(xiàn)ab片段抗體,用Phenyl Sepharose High Performance疏水色譜柱(Pharmacia)分二次純化:一次純化A液為1~1.4M硫酸胺0.05M PH5.0酸鈉緩沖液,B液為0.05M PH5.0醋酸鈉緩沖液;二次純化A液用0.7~1.0M硫酸胺0.05M PH5.0醋酸鈉緩沖液,B液為0.05M PH5.0醋酸鈉緩沖液,線性梯度洗脫時間30-40分鐘;純化后立即凍干,加10%低分子右旋糖酐做復(fù)性劑。  
摘要 單克隆抗體雙段和單段的制備方法。涉及生物技術(shù)工程,其主要技術(shù)路線是:粗提抗體→酶切→二次純化→凍干,制備的F(ab’)2、Fab的純度可大于98%,回收率大于50%,且可有效去除熱原質(zhì),核酸、病毒等雜質(zhì),在安全、有效、穩(wěn)定、一致性上,均達(dá)到中國藥品生物制品鑒定所人用源性單抗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。  
國際公布  
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