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一種篩選人組織相容性抗原(HLA)的T細(xì)胞表面抗原肽的體系,及其在制備MHC-抗原肽多聚體中的應(yīng)用

公開(kāi)(公告)號(hào) CN1511958A  
公開(kāi)(公告)日 2004.07.14  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN02159974.2  
申請(qǐng)日期 2002.12.31  
專利名稱 一種篩選人組織相容性抗原(HLA)的T細(xì)胞表面抗原肽的體系,及其在制備MHC-抗原肽多聚體中的應(yīng)用  
主分類號(hào) C12Q1/68  
分類號(hào) C12Q1/68;G01N33/68;C07K14/435;C07K14/47;A61K38/17;A61P37/06  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 王小寧  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 徐小寧;王小寧  
地址 510630廣東省廣州市天河北路599號(hào)1801  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專利代理機(jī)構(gòu)  
代理人  
國(guó)省代碼 廣東;44  
主權(quán)項(xiàng) 一種篩選人組織相容性抗原(HLA)的T細(xì)胞表面抗原肽的方法,其包括以下步驟:(1)用iRNA技術(shù)制備表達(dá)不同HLA抗原(包括I類和II類抗原)的、內(nèi)源性抗原肽提呈表達(dá)缺陷的T2樣細(xì)胞系;(2)制備人主要及次要組織相容性抗原的肽鏈基因庫(kù);(3)利用步驟(2)制備的基因庫(kù),制備噬菌體肽展示體系;(4)把步驟(1)制備的T2樣細(xì)胞系與步驟(3)制備的噬菌體混合;(5)洗滌去除不結(jié)合的噬菌體;(6)利用抗噬菌體衣殼蛋白抗體檢測(cè)噬菌體結(jié)合的情況和條件;(7)用洗脫液進(jìn)行梯度洗脫去除親和性不高的噬菌體;(8)加入噬菌體敏感宿主大腸桿菌使T2樣細(xì)胞上的噬菌體感染大腸桿菌,并得以擴(kuò)增;(9)由大腸桿菌中進(jìn)一步分離噬菌體質(zhì)粒,并對(duì)其中的cDNA克隆測(cè)序、篩選出與MHC分子結(jié)合的肽段序列;(10)合成所篩選的肽段,結(jié)合至T2樣細(xì)胞用該細(xì)胞刺激T細(xì)胞反應(yīng),確認(rèn)肽段T細(xì)胞表位活性。  
摘要 本發(fā)明屬生物醫(yī)藥領(lǐng)域,是關(guān)于一種篩選人組織相容性抗原(HLA)的T細(xì)胞表面抗原肽的體系,及其在制備MHC-抗原肽多聚體中的應(yīng)用。利用該組抗原肽制備的MHC-肽四聚體(MHC tetramer)可用于同種移植排斥反應(yīng)的監(jiān)測(cè),并指導(dǎo)臨床合理使用免疫抑制劑。  
國(guó)際公布  
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