公開(kāi)(公告)號(hào)
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CN1523118A
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公開(kāi)(公告)日
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2004.08.25
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN03111037.1
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申請(qǐng)日期
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2003.02.21
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專利名稱
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一種以結(jié)核桿菌細(xì)胞壁為靶點(diǎn)的藥物篩選方法
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主分類號(hào)
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C12Q1/32
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分類號(hào)
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C12Q1/32;C12Q1/26;C12Q1/68
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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杜昱光;馬郁芳;陸海峰;趙小明;白雪芳;;李曙光
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地址
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116023遼寧省大連市中山路457號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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沈陽(yáng)科苑專利商標(biāo)代理有限公司
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代理人
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許宗富;周秀梅
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國(guó)省代碼
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遼寧;21
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主權(quán)項(xiàng)
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一種以結(jié)核桿菌細(xì)胞壁為靶點(diǎn)的藥物篩選方法,其特征在于:在含有50~100mM HEPES(pH7.6)、1~10mM NAD+、100~500nmol dTDP-Glc、4~12μg/ml蛋白的RmlB酶蛋白溶液中加入中藥、藏藥、天然產(chǎn)物的有效成分或組合化學(xué)產(chǎn)物,在25~37℃下培育1~5hr后,再加入1m10.1MNaOH培育10~40min,取出檢測(cè)318nm下吸光值的變化,根據(jù)體系吸光值的變化,確定所加入物質(zhì)是否是以結(jié)核桿菌細(xì)胞壁為靶點(diǎn)的藥物。
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摘要
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本發(fā)明是通過(guò)應(yīng)用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)從結(jié)核分枝桿菌基因組文庫(kù)中克隆了rmlB基因,其編碼dTDP-D-葡萄糖-4,6-脫氫酶(RmlB),并在大腸桿菌中表達(dá)了結(jié)核分枝桿菌的RmlB酶蛋白(rmlB是結(jié)核桿菌的生長(zhǎng)相關(guān)基因,其基因所表達(dá)的蛋白酶是結(jié)核桿菌細(xì)胞壁形成過(guò)程中必須的),菌株經(jīng)過(guò)超聲破碎細(xì)胞,離心,取上清液,利用pET表達(dá)載體上的組氨酸標(biāo)記,采用組氨酸-Ni+親和層析技術(shù)純化得到RmlB酶蛋白,并建立了RmlB酶蛋白的活性測(cè)定方法。利用這個(gè)酶活性測(cè)定方法,根據(jù)加入中藥、藏藥及天然產(chǎn)物的有效成分以及組合化學(xué)產(chǎn)物后RmlB酶蛋白的活性大小或有無(wú)建立了抗結(jié)核藥物的模型。
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國(guó)際公布
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