公開(公告)號(hào) | CN1526829A |
公開(公告)日 | 2004.09.08 |
申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN03113853.5 |
申請(qǐng)日期 | 2003.03.04 |
專利名稱 | 病原微生物診斷型基因芯片的快速檢測(cè)方法 |
主分類號(hào) | C12Q1/68 |
分類號(hào) | C12Q1/68;C12Q1/04 |
分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
優(yōu)先權(quán) | |
申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國人民解放軍基因工程研究所 |
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 馬文麗;鄭文嶺;石嶸 |
地址 | 510515廣東省廣州市同和第一軍醫(yī)大學(xué)分子生物學(xué)研究所 |
頒證日 | |
國際申請(qǐng) | |
進(jìn)入國家日期 | |
專利代理機(jī)構(gòu) | 廣州知友專利代理有限公司 |
代理人 | 邵毓琴 |
國省代碼 | 廣東;44 |
主權(quán)項(xiàng) | 病原微生物診斷型基因芯片的快速檢測(cè)方法,包括以下步驟:(1)玻片的準(zhǔn)備;(2)探針準(zhǔn)備:采用PCR擴(kuò)增病原體全基因組的各個(gè)基因和特異性片段,探針長(zhǎng)度從數(shù)百到數(shù)千堿基不等,濃度在0.25~0.5μg/μL;(3)芯片制備:采用基因芯片點(diǎn)樣儀進(jìn)行點(diǎn)樣;(4)打印后處理;(5)樣品的處理:在PCR擴(kuò)增過程中,Cy5-dUTP進(jìn)行摻入標(biāo)記,在標(biāo)記前或標(biāo)記后引入限制性酶切,使獲得片段長(zhǎng)度在200~600bps之間;(6)雜交:2×雜交緩沖液的配方為60%甲酰胺、12×SSC、0.24%SDS;(7)雜交后清洗;(8)掃描檢測(cè)。 |
摘要 | 本發(fā)明公開了一種病原微生物診斷型基因芯片的快速檢測(cè)方法,包括以下步驟:(1)玻片的準(zhǔn)備;(2)探針準(zhǔn)備:采用PCR擴(kuò)增病原體全基因組的各個(gè)基因和特異性片段,探針長(zhǎng)度從數(shù)百到數(shù)千堿基不等,濃度在0.25~0.5μg/μL;(3)芯片制備:采用基因芯片點(diǎn)樣儀進(jìn)行點(diǎn)樣;(4)打印后處理;(5)樣品的處理:在PCR擴(kuò)增過程中,Cy5-dUTP進(jìn)行摻入標(biāo)記,在標(biāo)記前或標(biāo)記后引入限制性酶切,使獲得片段長(zhǎng)度在200~600bps之間;(6)雜交:2×雜交明沖液的配方為60%甲酰胺、12×SSC、0.24%SDS;(7)雜交后清洗;(8)掃描檢測(cè)。本發(fā)明具有標(biāo)記效率高、雜交檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定、雜交時(shí)間大大病短等優(yōu)點(diǎn),可將雜交時(shí)間從傳統(tǒng)的16~20小時(shí)縮短到10分鐘,尤其適用于臨床感染性疾病的診斷。 |
國際公布 |