公開(公告)號
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CN1174097C
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公開(公告)日
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2004.11.03
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申請(專利)號
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CN96195808.1
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申請日期
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1996.06.05
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專利名稱
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由克隆的維生素D結(jié)合蛋白衍生的巨噬細胞激活因子
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主分類號
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C12N15/10
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分類號
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C12N15/10;C07K14/435
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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1995.6.7 US 08/478,121; 1996.3.19 US 08/618,485
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申請(專利權(quán))人
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山本信人
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發(fā)明(設(shè)計)人
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山本信人
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地址
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美國賓夕法尼亞州
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頒證日
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國際申請
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PCT/US1996/008867 1996.6.5
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進入國家日期
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1998.01.24
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專利代理機構(gòu)
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永新專利商標代理有限公司
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代理人
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林曉紅
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國省代碼
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美國;US
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主權(quán)項
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用于將維生素D3結(jié)合蛋白即Gc蛋白質(zhì)或維生素D3結(jié)合蛋白區(qū)域III即Gc區(qū)域III克隆到桿狀病毒的方法,包括選擇和利用桿狀病毒載體克隆Gc蛋白質(zhì)或Gc區(qū)域III的步驟:(a)利用免疫篩選方法從人肝λgt11分離全長Gc蛋白質(zhì)DNA文庫并且插入到非融合的桿狀病毒載體中;或通過用EcoRI和HaeIII酶消化Gc蛋白質(zhì)DNA而分離Gc蛋白質(zhì)的起始前導序列加5’末端4個氨基酸的DNA和Gc蛋白質(zhì)區(qū)域IIIDNA,并利用連接酶將其插入到非融合桿狀病毒載體pVL1393的EcoRI位點;或利用HaeIII和BamHI酶分離Gc蛋白質(zhì)區(qū)域IIIcDNA并且利用連接酶將其插入到融合的桿狀病毒載體pPbac中以取代信號序列下游的SmaI-BamHI填充片段;(b)通過將昆蟲細胞用載體DNA和野生型桿狀病毒DNA共轉(zhuǎn)染以分離攜帶全長Gc蛋白質(zhì)cDNA或Gc蛋白質(zhì)區(qū)域IIIcDNA的重組桿狀病毒;和(c)在昆蟲細胞中繁殖重組桿狀病毒并且純化克隆的Gc蛋白質(zhì)或克隆的區(qū)域蛋白質(zhì)Cd。
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摘要
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借助于桿狀病毒載體克隆了維生素D結(jié)合蛋白(Gc蛋白質(zhì))和其小區(qū)域(約為Gc肽的1/5,已知稱作為區(qū)域III)。用固定化的β-半乳糖苷酶和唾液酸酶處理克隆的Gc蛋白質(zhì)和克隆的區(qū)域(Cd)肽分別產(chǎn)生巨噬細胞激活因子GcMAFc和CdMAF。這些克隆的巨噬細胞激活因子和GcMAF可用于治療癌癥,HIV感染和骨質(zhì)疏松癥,也用作為免疫和接種的佐劑。研制了在癌癥和HIV感染的患者中檢測血清或血漿α-N-乙酰氨基半乳糖苷酶的方法和抗體-夾心ELISA試劑盒。
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國際公布
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WO1996/040903 英 1996.12.19
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