動(dòng)物細(xì)胞無血清懸浮培養(yǎng)工藝過程控制參數(shù)的方法
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公開(公告)號(hào)
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CN1557948A
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公開(公告)日
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2004.12.29
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200410025862.6
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申請(qǐng)日期
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2004.02.12
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專利名稱
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動(dòng)物細(xì)胞無血清懸浮培養(yǎng)工藝過程控制參數(shù)的方法
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主分類號(hào)
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C12N5/16
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分類號(hào)
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C12N5/16;C12P21/00
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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陳志南
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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米 力;馮 強(qiáng);李 玲;王賢輝
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地址
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710032陜西省西安市長樂西路17號(hào)
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頒證日
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國際申請(qǐng)
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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西安通大專利代理有限責(zé)任公司
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代理人
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李鄭建
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國省代碼
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陜西;61
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主權(quán)項(xiàng)
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一種生產(chǎn)重組蛋白治療藥物的動(dòng)物細(xì)胞無血清懸浮培養(yǎng)工藝過程控制參數(shù)的方法，動(dòng)物細(xì)胞包括雜交瘤或CHO或SP2/0或NSO工程細(xì)胞，這些細(xì)胞分泌表達(dá)重組蛋白治療藥物；培養(yǎng)工藝控制流加濃縮的谷氨酰胺、葡萄糖和氨基酸等營養(yǎng)物的速率，結(jié)合灌流無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基降低代謝產(chǎn)物濃度的方法；其特征在于，包括以下步驟：1)用機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器無血清懸浮培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞，起始接種細(xì)胞密度為1×105～3×105cells/ml；培養(yǎng)環(huán)境維持在溫度36℃-37℃、pH值為6.5-7.4、攪拌速度40-80轉(zhuǎn)/分、溶氧濃度即空氣飽和度40％～80％；2)培養(yǎng)過程參數(shù)主要采用針對(duì)特定細(xì)胞生長代謝需求，設(shè)定谷氨酰胺、葡萄糖、氨、乳酸的上/下限濃度指標(biāo)，控制流加濃縮的谷氨酰胺、葡萄糖和氨基酸等營養(yǎng)物的速率；過程控制的參數(shù)包括：a.無血清培養(yǎng)基起始谷氨酰胺的濃度為2.0～3.5mM；b.無血清培養(yǎng)基起始葡萄糖的濃度為0～5g/L；c.培養(yǎng)過程谷氨酰胺的最低下限為0.1～0.3mM；d.培養(yǎng)過程葡萄糖的最低下限為0.25～0.5g/L；e.培養(yǎng)過程氨離子的最高上限為2～4mM；f.培養(yǎng)過程乳酸的最高上限為15～25mM；g.培養(yǎng)過程通過氧氣攝入率即qOUR的變化，即時(shí)監(jiān)測反應(yīng)細(xì)胞生長狀態(tài)；h.培養(yǎng)過程細(xì)胞的氧氣攝入率在qOUR＝0.10×10-12～0.15×10-12mol/cell/h；當(dāng)qOUR≤0.07×10-12mol/cell/h，需改變流加速率或灌流速率，或調(diào)整培養(yǎng)環(huán)境；i.當(dāng)培養(yǎng)液中谷氨酰胺、葡萄糖濃度低于下限時(shí)，開始流加濃縮營養(yǎng)物；當(dāng)培養(yǎng)液中氨和乳酸的濃度高于上限時(shí)，開始灌流無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基，灌流速率為0.3-0day-1；3)培養(yǎng)過程細(xì)胞由對(duì)數(shù)生長期進(jìn)入平穩(wěn)期并維持較長時(shí)間，其產(chǎn)物濃度逐漸升高，當(dāng)細(xì)胞群體生長處于衰退期且產(chǎn)物濃度不再持續(xù)增加時(shí)停止培養(yǎng)。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種動(dòng)物細(xì)胞無血清懸浮培養(yǎng)生產(chǎn)重組蛋白治療藥物的工藝過程控制參數(shù)方法，該工藝采用流加濃縮的能源物質(zhì)和氨基酸，結(jié)合灌流基礎(chǔ)培養(yǎng)基的方法。過程控制參數(shù)主要針對(duì)特定細(xì)胞生長代謝需求，設(shè)定谷氨酰胺、葡萄糖、氨、乳酸的上/下限濃度指標(biāo)，控制流加濃縮的谷氨酰胺、葡萄糖和氨基酸等營養(yǎng)物的速率，結(jié)合灌流無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基降低代謝產(chǎn)物濃度的方法；采用氧氣攝入率即時(shí)監(jiān)測反應(yīng)細(xì)胞生長狀態(tài)；用計(jì)算機(jī)程控補(bǔ)料系統(tǒng)精確控制流加速率；該工藝特別適宜雜交瘤細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)治療用抗體，具有穩(wěn)定性好、可控性強(qiáng)、過程控制指標(biāo)明確、可操作性強(qiáng)、批次間結(jié)果差異小等特點(diǎn)。
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國際公布
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評(píng)論加載中...
