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人源甲硫氨酰氨肽酶1的表達方法及它在尋找抗腫瘤藥物中應用

公開(公告)號 CN1609221A  
公開(公告)日 2005.04.27  
申請(專利)號 CN200310108025.5  
申請日期 2003.10.20  
專利名稱 人源甲硫酰氨肽酶1的表達方法及它在尋找抗腫瘤藥物中應用  
主分類號 C12N15/52  
分類號 C12N15/52;C12N9/48;C12Q1/25  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權  
申請(專利權)人 中國科學院上海藥物研究所  
發(fā)明(設計)人 李佳;南發(fā)俊;葉其壯;李靜雅;羅群力;陳玲玲;崔永梅  
地址 201203上海市浦東張江高科技園區(qū)祖沖之路555號  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構 上海開祺專利代理有限公司  
代理人 費開逵;季良赳  
國省代碼 上海;31  
主權項 一種人源I型甲硫氨酰肽酶(HsMetAP1)及它的缺失突變(HsMetAP1Δ1-66,HsMetAP1Δ1-135)的表達方法,包括如下步驟:(1)設計不同的正、反向引物;(2)以人源膀胱細胞ECV304的總RNA為模板用RT-PCR方法得該細胞的cDNA,利用上述設計的引物和得到的cDNA用PCR方法得到HsMetAP1的編碼序列;(3)用內(nèi)切酶EcoRI和SalI雙酶切質粒載體pGEX-KG用T4連接酶連接、純化得重組質粒pGEX-KG/HsMetAP1;(4)將上述重組質粒轉化入大腸桿菌表達,經(jīng)提取、純化得活性蛋白HsMetAP1或HsMetAP1Δ1-66,HsMetAP1Δ1-135。  
摘要 本發(fā)明公開了一種人源I型甲硫氨酰氨肽酶HsMetAP1在原核生物大腸桿菌的表達系統(tǒng),并純化得到活性蛋白并找到了其活性關鍵結構的要求;本發(fā)明公開了建立HsMetAP1的高通量篩選模型,應用該模型篩選得到活性化合物,找到了活性化合物具有抑制腫瘤細胞生長的活性,以及人源I型甲硫氨酰氨肽酶與腫瘤之間的關系。  
國際公布  
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