| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1648241A |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2005.08.03 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410005061.3 |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.01.19 |
| 專利名稱 | 一種牛腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞分離純化的方法 |
| 主分類號(hào) | C12N5/06 |
| 分類號(hào) | C12N5/06 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 馬小軍;張曉慧;王為 |
| 地址 | 116023遼寧省大連市中山路457號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 周長(zhǎng)興 |
| 國(guó)省代碼 | 遼寧;21 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種牛腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞分離純化的方法，其主要步驟是：分離：a)選擇牛腎上腺，保存于0-6℃的D-Hank’s液中；b)逆靜脈灌注無(wú)鈣、鎂D-Hank’s液后，將腎上腺浸泡在D-Hank’s液中，使殘留在血管中的血細(xì)胞充分滲出；c)逆腎上腺靜脈灌注質(zhì)量百分比濃度為0.05-0.15％的I型膠原酶2-7ml，在37℃恒溫震蕩水浴中消化20-50min，使皮質(zhì)和髓質(zhì)及髓質(zhì)細(xì)胞之間的膠原成分充分解離；d)剝除皮質(zhì)，將髓質(zhì)剪碎成0.5-5mm3左右的小塊，滴加D-Hank’s液以保持髓質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)；e)將剪切后的髓質(zhì)塊依次研磨過(guò)50、200、350目篩網(wǎng)，并用D-Hank’s液沖洗過(guò)濾；收集的細(xì)胞用D-Hank’s液離心洗滌，最終接種于含有體積比5-20％牛血清的DMEM培養(yǎng)液中；純化：f)分別配制密度為090g/ml、064g/ml、034g/ml和019g/ml的Percoll溶液；g)將分離步驟中e制得的細(xì)胞懸液沉淀，與密度為090g/ml的Percoll溶液混懸后，加入離心管底，在其上依次加入密度為064g/ml、034g/ml、019g/ml的Percoll溶液離心；h)收集介于密度為064g/ml與034g/ml的Percoll溶液之間的細(xì)胞，加入D-Hank’s液離心洗滌；最終將細(xì)胞接種于含有體積比5-20％牛血清的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)。 |
| 摘要 | 一種牛腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞分離純化的方法，逆腎上腺靜脈灌注膠原酶溶液，在一定溫度下，充分水解腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞與皮質(zhì)細(xì)胞、髓質(zhì)細(xì)胞之間的膠原蛋白成分。剝離后的髓質(zhì)通過(guò)機(jī)械剪切和梯度過(guò)篩，得到離散的腎上腺嗜鉻細(xì)胞懸液，再利用懸液中細(xì)胞密度的差異將細(xì)胞進(jìn)行純化。利用Percoll非連續(xù)密度梯度法純化牛腎上腺嗜鉻細(xì)胞，平均每個(gè)腎上腺可分離得到0.7×108～3.1×108個(gè)純度在95％以上的嗜鉻細(xì)胞，而且細(xì)胞形態(tài)良好、活性達(dá)到99％。 |
| 國(guó)際公布 |
