| 公開(公告)號 | CN1260247C |
| 公開(公告)日 | 2006.06.21 |
| 申請(專利)號 | CN200310108421.8 |
| 申請日期 | 2003.11.05 |
| 專利名稱 | 一種用于重組tPA衍生物的大規(guī)模包涵體復性純化技術(shù) |
| 主分類號 | C07K1/113(2006.01)I |
| 分類號 | C07K1/113(2006.01)I;C12N9/72(2006.01)I;C12N9/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 上海中科伍佰豪生物工程有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 張 毅;陸堅峰;楊勝利;褚仲梅;劉 成;屈賢銘 |
| 地址 | 200233上海市漕寶路500號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 上海專利商標事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 徐 迅 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項 | 一種蛋白質(zhì)復性方法，其特征在于，包括步驟：(a)將目標蛋白質(zhì)的包涵體溶解，離心獲得溶解有包涵體蛋白質(zhì)的上清液；(b)用第一復性液稀釋上清液，形成目標蛋白質(zhì)的濃度為100-1000微克/毫升的第一稀釋溶液，其中，第一復性液含3-7M選自尿素或鹽酸胍的變性劑和緩沖液，pH7.5-9.0，并且第一復性液中所含的氧化型谷胱甘肽及還原型谷胱甘肽與目標蛋白質(zhì)之比為4-10mmol谷胱甘肽：0.1-1mg目標蛋白，且還原型谷胱甘肽與氧化型谷胱甘肽的摩爾比為4-6：0.8-2；(c)在20-28℃下，放置第一稀釋溶液16-24小時；(d)用第二復性液稀釋第一稀釋溶液，形成目標蛋白質(zhì)的濃度為10-100微克/毫升的第二稀釋溶液，其中，第二復性液含0.1-2.5M尿素和緩沖液，pH7.5-9.0：(e)在20-28℃下，放置第二稀釋溶液16-24小時；(f)過濾第二稀釋溶液，將濾液體積超濾濃縮為原體積的1/8-1/40，獲得第一濃縮濾液；(g)過濾第一濃縮濾液，然后將濾液稀釋于3-7倍體積的pH調(diào)節(jié)緩沖液中，所述的pH調(diào)節(jié)緩沖液含有10-100mM醋酸堿土金屬鹽或醋酸銨，pH4.0-5.5；(h)過濾步驟(g)的稀釋溶液，將溶液體積超濾濃縮為原體積的1/3-1/10，獲得含有復性的目標蛋白的第二濃縮濾液。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提供了一種蛋白質(zhì)復性方法，包括步驟：(a)將目標蛋白質(zhì)的包涵體溶解，離心獲得溶解有包涵體蛋白質(zhì)的上清液；(b)用第一復性液稀釋，其中第一復性液含氧化還原對；(c)放置一段時間；(d)用第二復性液稀釋，第二復性液不含氧化還原對；(e)放置一段時間；(f)過濾、濃縮，獲得第一濃縮濾液；(g)過濾，然后將濾液稀釋于pH調(diào)節(jié)緩沖液中，調(diào)節(jié)pH至4.0-5.5；(h)過濾步驟(g)的稀釋溶液，濃縮獲得含有復性的目標蛋白的第二濃縮濾液。本發(fā)明復性方法成本低，用于大腸桿菌表達的重組tPA或其衍生物的低成本的重組蛋白質(zhì)。 |
| 國際公布 |
