| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1300311C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2007.02.14 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200510050077.0 |
| 申請(qǐng)日期 | 2005.06.14 |
| 專利名稱 | 殼聚糖內(nèi)切酶的制備方法 |
| 主分類號(hào) | C12N9/24(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N9/24(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 浙江大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 鄭連英;隋斯光 |
| 地址 | 310027浙江省杭州市浙大路38號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 張法高 |
| 國(guó)省代碼 | 浙江;33 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種殼聚糖內(nèi)切酶的制備方法，其特征在于方法的步驟如下：1)將保藏號(hào)為：CGMCC No.0851的高產(chǎn)殼聚糖酶生產(chǎn)菌Penicillium sp接種在5L的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)基裝液量3-4L，接種量為10％-20％，培養(yǎng)溫度為26-32℃、攪拌速度為200-450r·min-1、通氣量為1.5-5L·min-1，發(fā)酵50-80小時(shí)后，過(guò)濾除去懸浮菌體得到殼聚糖粗酶液，所述的培養(yǎng)基為：殼聚糖5-40g/L、尿素0.5-3g/L、磷酸二氫鉀0.2-1g/L、硫酸銨0.5-3g/L、硫酸鎂0.1-0.5g/L；2)截留相對(duì)分子質(zhì)量為2-20kDa的超濾膜對(duì)粗酶液進(jìn)行超濾，然后，用2-4倍的冰乙醇沉淀或者用20％-80％硫酸銨分級(jí)沉淀得到殼聚糖粗酶沉淀物；3)用pH 4.4-5.5，10-50mmol乙酸緩沖液溶解殼聚糖粗酶沉淀物，再上HiPrep 16/10SP XL陽(yáng)離子交換柱，用含0.5-2mol氯化鈉、10-50mmol乙酸緩沖液，0-100％線形梯度洗脫，得到殼聚糖內(nèi)切酶溶液；4)用Sephadex G 50凝膠過(guò)濾柱過(guò)濾，乙酸緩沖液洗脫，濃縮、冷凍、真空干燥得到殼聚糖內(nèi)切酶。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開(kāi)了一種殼聚糖內(nèi)切酶的制備方法。用高產(chǎn)殼聚糖酶菌株(國(guó)家發(fā)明專利號(hào)ZL 02159880.0，菌種保藏號(hào)為CGMCC No.0851)，接種到加入適量殼聚糖、氮源和無(wú)機(jī)鹽的溶液的發(fā)酵罐中培養(yǎng)，過(guò)濾除去大部分懸浮菌體，得到殼聚糖酶粗酶液，發(fā)酵粗酶液，先后采用超濾濃縮、有機(jī)溶劑或硫酸銨沉淀、陽(yáng)離子交換和凝膠過(guò)濾、冷凍真空干燥等分離純化的方法分離純化得到一種殼聚糖內(nèi)切酶。本發(fā)明的菌種遺傳性穩(wěn)定，發(fā)酵條件常規(guī)化，得到的殼聚糖內(nèi)切酶純度較高，適用于制備相對(duì)分子質(zhì)量分布較窄的高純度殼低聚糖產(chǎn)品。 |
| 國(guó)際公布 |
