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公開(公告)號
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CN1810954A
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公開(公告)日
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2006.08.02
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申請(專利)號
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CN200510112983.9
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申請日期
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2005.10.18
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專利名稱
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一種利用大腸桿菌生產(chǎn)人α防御素1蛋白的方法
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主分類號
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C12N1/21(2006.01)I
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分類號
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C12N1/21(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K14/435(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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甘肅亞盛鹽化工業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任公司
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發(fā)明(設(shè)計)人
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周長生;陳其新;李春麗;陳正華
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地址
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730030甘肅省蘭州市城關(guān)區(qū)張掖路219號
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機構(gòu)
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甘肅省專利服務(wù)中心
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代理人
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田玉蘭;程 萍
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國省代碼
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甘肅;62
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主權(quán)項
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一種利用大腸桿菌生產(chǎn)人α防御素1蛋白的方法，包括以下步驟： (1)使用SEQIDNO1所示的序列片段 1ATGGCCTGCTATTGCCGTATTCCAGCCTGC 31ATTGCAGGCGAACGTCGTTATGGCACCTGC 61ATCTACCAGGGCCGTCTCTGGGCATTCTGC 91TGCTGATAAG 下劃線為起始密碼子或雙終止密碼子及側(cè)翼序列 (2)將上述基因序列插入T7型Trx融合表達(dá)載體中，獲得重組質(zhì)粒pET32a-mHNP1。 (3)將pET32a-mHNP1導(dǎo)入匹配大腸桿菌中組成完整表達(dá)體系； (4)用異丙基硫代-β-D半乳糖糖苷誘導(dǎo)上述體系在菌體內(nèi)表達(dá)人HNP1成熟蛋白。
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摘要
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本發(fā)明提供了一種利用大腸桿菌生產(chǎn)生物活性物質(zhì)人α防御素1蛋白的方法及其適用的優(yōu)化設(shè)計DNA序列和重組表達(dá)質(zhì)粒。包括：使用由人α防御素1成熟肽編碼序列優(yōu)化設(shè)計后獲得的序列SEQ ID NO：1，構(gòu)建成原核表達(dá)載體質(zhì)粒pET32a-mHNP1，將質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌BL21(DE3)pLysS，化學(xué)誘導(dǎo)表達(dá)人α-防御素1。本法可克服因α防御素1蛋白對宿主菌本身的毒害作用而引起的低表達(dá)甚至不表達(dá)，大量生產(chǎn)有活性的人α防御素1蛋白，滿足有關(guān)結(jié)構(gòu)、生化性質(zhì)研究及抗體制備等方面的需要，也可應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域。
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國際公布
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