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公開(公告)號(hào)
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CN1796562A
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公開(公告)日
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2006.07.05
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200410094011.7
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申請(qǐng)日期
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2004.12.24
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專利名稱
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突變型p53基因反義表達(dá)載體及其制備方法
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主分類號(hào)
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C12N15/63(2006.01)I
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分類號(hào)
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C12N15/63(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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付 麗;許少峰;張 斌;張媛媛;馮玉海
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地址
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300060天津市河西區(qū)體院北環(huán)湖西路天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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天津市宗欣專利商標(biāo)代理有限公司
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代理人
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董光仁
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國(guó)省代碼
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天津;12
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主權(quán)項(xiàng)
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一種突變型p53基因反義表達(dá)載體，其特征在于該載體上連接有突變的p53外顯子8基因序列： GAATTCGCTTTGAGGTGCGTGTTTGTGCCTGTCCTGGGAAAGACCGGCGC ACAGAGGAAGGAGGTCTCCGCAAGAAAGGGGAGCCTCACCACTGCAGGCA TGCAAGGCT； 并由此載體能夠轉(zhuǎn)錄出與此突變點(diǎn)特異性結(jié)合的互補(bǔ)反義RNA，從而阻斷突變p53信號(hào)的表達(dá)。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種突變型p53基因反義表達(dá)載體及其制備方法，屬于基因工程技術(shù)。本發(fā)明載體上連接有突變的p53外顯子8基因序列，并能夠轉(zhuǎn)錄出與此突變點(diǎn)特異性結(jié)合的互補(bǔ)反義RNA，從而阻斷突變p53信號(hào)的表達(dá)；其制備方法是采用免疫組化篩選突變型p53細(xì)胞系、PCR-SSCP法及基因測(cè)序確定突變的p53外顯子和基因序列，把含有突變位點(diǎn)的p53外顯子8序列插入pGEM3zf(+/-)質(zhì)粒載體的多克隆位點(diǎn)處，構(gòu)建pGEM3zf(+/-)p53exon8’重組載體。這樣制備的反義RNA被直接導(dǎo)入研究細(xì)胞內(nèi)，因?yàn)槭侵苯訉?dǎo)入反義RNA本身，所導(dǎo)入的RNA分子量小，較易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，操作簡(jiǎn)單；由于體外轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)能合成較多量的產(chǎn)物，可隨時(shí)重復(fù)操作，滿足需要的RNA量。
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國(guó)際公布
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