公開(公告)號
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CN1786154A
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公開(公告)日
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2006.06.14
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申請(專利)號
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CN200510015492.2
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申請日期
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2005.10.18
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專利名稱
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人胎盤、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫及其構(gòu)建方法
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主分類號
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C12N5/08(2006.01)I
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分類號
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C12N5/08(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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天津昂賽細(xì)胞基因工程有限公司
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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韓忠朝;劉擁軍
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地址
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300457天津市泰達(dá)開發(fā)區(qū)第四大街天大科技園B3-B4
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所
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代理人
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陸 藝
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國省代碼
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天津;12
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主權(quán)項(xiàng)
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一種人胎盤、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫,其特征是由下述步驟建成: (1)取人胎盤、臍帶進(jìn)行ABO/Rh血型檢測、HLA分型的檢測、微生物免疫檢測,用磷酸緩沖液沖洗去除殘留血液,粉碎,加入1~1.5倍于粉碎物體積的磷酸緩沖液稀釋; (2)加入步驟(1)所獲得溶液體積的1/2~1/3的質(zhì)量/體積比為0.05%~0.2%的膠原酶磷酸緩沖液溶液消化,溫度為37℃,消化40~70分鐘,過100-200目篩,將濾過的細(xì)胞混懸液與未消化組織分開; (3)向未消化組織中,加入1~1.5倍于未消化組織體積的磷酸緩沖液稀釋; (4)加入步驟(3)所獲得溶液體積的1/2~1/3的質(zhì)量/體積比為0.05%~0.2%的胰酶磷酸緩沖液溶液消化,消化溫度為37℃,消化時(shí)間為10~30分鐘,在此100ml溶液中加入1-2g的血清終止胰酶作用,過100-200目篩,濾過液為細(xì)胞混懸液; (5)將步驟(2)及步驟(4)所獲得的細(xì)胞混懸液混合,離心,棄去上清液,用磷酸緩沖液洗滌1~3次去除殘余酶,再離心,棄去上清液,即獲得間充質(zhì)干細(xì)胞; (6)將間充質(zhì)干細(xì)胞置液氮冷凍,按其ABO/Rh分型和HLA分型進(jìn)行保存,建立可供檢索的細(xì)胞信息檔案,即構(gòu)建出人胎盤、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種人胎盤、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫及其構(gòu)建方法,本發(fā)明的構(gòu)建步驟包括:(1)取人胎盤、臍帶進(jìn)行檢測,用磷酸緩沖液沖洗滌后粉碎,加磷酸緩沖液稀釋;(2)加入膠原酶消化;(3)加入磷酸緩沖液稀釋;(4)加入胰酶消化;(5)將步驟(2)及步驟(4)所獲得的細(xì)胞混合,離心,棄去上清液,用磷酸緩沖液洗滌,再離心,棄去上清液,即獲得間充質(zhì)干細(xì)胞;(6)將間充質(zhì)干細(xì)胞置液氮冷凍,按其ABO/Rh分型和HLA分型進(jìn)行保存,建立可供檢索的細(xì)胞信息檔案,即構(gòu)建出人胎盤、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫。本發(fā)明為新生兒儲存胎盤及臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,為其本人、家屬和他人提供間充質(zhì)干細(xì)胞治療疾病及其他應(yīng)用。
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國際公布
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