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ω-芋螺毒素MVIIA突變體及制備和應(yīng)用

公開(公告)號(hào) CN1876176A  
公開(公告)日 2006.12.13  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN200610052400.2  
申請(qǐng)日期 2006.07.11  
專利名稱 ω-芋螺毒素M VII A突變體及制備和應(yīng)用  
主分類號(hào) A61K38/17(2006.01)I  
分類號(hào) A61K38/17(2006.01)I;A61P29/00(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 浙江大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 詹金彪;夏 錚;王 峰;徐小蓉;黃建松  
地址 310027浙江省杭州市西湖區(qū)浙大路38號(hào)  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 杭州求是專利事務(wù)所有限公司  
代理人 張法高;趙杭麗  
國(guó)省代碼 浙江;33  
主權(quán)項(xiàng) 一種ω-芋螺毒素M VII A突變體,具有SEQ ID NO:1的基酸序列: Gly-Ser-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys 27,該多肽有機(jī)化合物分子中Cys3與Cys18、Cys10與Cys22、Cys17與Cys27之間分別形成三對(duì)二硫鍵,C-端為非酰胺化Cys。  
摘要 本發(fā)明提供一種重組ω-芋螺毒素M VII A(CTX M VIIA)突變體,具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列,采用與谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)融合表達(dá)的方法,在已構(gòu)建的pGEX-2T/CTX M VIIA原核表達(dá)質(zhì);A(chǔ)上,在大腸桿菌中用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)GST-CTX M VIIA融合蛋白,經(jīng)GST親和層析的方法純化融合蛋白,用凝血酶進(jìn)行酶切產(chǎn)生CTX M VIIA的突變體,產(chǎn)物經(jīng)過凝膠柱進(jìn)行分離純化;為獲得正確的二硫鍵配對(duì),先用還原劑將突變體的二硫鍵配打開,再用PBS透析過夜,空氣化獲得目的產(chǎn)物。本發(fā)明方法,操作簡(jiǎn)單、質(zhì)量穩(wěn)定、成本較低,可在制備無成癮型的鎮(zhèn)痛藥物中應(yīng)用。  
國(guó)際公布  
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