| 公開(公告)號 | CN1927886A |
| 公開(公告)日 | 2007.03.14 |
| 申請(專利)號 | CN200510098365.3 |
| 申請日期 | 2005.09.09 |
| 專利名稱 | 防治小鵝瘟病的異源抗小鵝瘟蛋黃抗體的制備方法與應用 |
| 主分類號 | C07K16/10(2006.01)I |
| 分類號 | C07K16/10(2006.01)I;A61K39/395(2006.01)I;A61P31/12(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 重慶永健生物技術有限責任公司 |
| 發(fā)明(設計)人 | 何洪章 |
| 地址 | 402460重慶市榮昌縣學院路158號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 北京集佳知識產權代理有限公司 |
| 代理人 | 劉繼富;顧晉偉 |
| 國省代碼 | 重慶;85 |
| 主權項 | 一種抗小鵝瘟異源蛋黃抗體制備方法，包括下列步驟： (a)將冷凍保存的患小鵝瘟疾病死亡的小鵝腸道病料按照1∶5加滅菌生理鹽水搗碎，凍融2次后，形成混合組織懸液；將混合組織懸液進行4000rpm離心，收集上清液并于56℃處理30分鐘，每毫升加入青霉素和鏈霉素1000單位，4℃處理2小時；將青、鏈霉素處理后的種毒液用滅菌生理鹽水稀釋100倍，經0.22um微孔濾膜過濾除菌，以0.1ml/只的劑量接種13-15日齡非免疫鵝胚尿囊腔，37℃孵育，棄去48小時內的死亡鵝胚，收集48-120小時內死亡的胚；無菌采集尿囊液及羊水； (b)將收獲的尿囊毒液中加入0.1％甲醛溶液，37℃密閉滅活48小時；滅活完成后，按滅活毒液96份，滅菌吐溫-804份配制，即為制苗用抗原；按油相3份、水相1份的比例取油相、水相攪拌均勻，加入高壓均質機中，調節(jié)壓力為35mpa，乳化制備成小鵝瘟滅活油乳劑疫苗，并加入1％硫柳汞溶液使之終濃度為萬分之一； (c)以制備的小鵝瘟滅活油乳劑抗原頸部皮下注射0.5ml/只；2周后，以制備的小鵝瘟滅活油乳劑抗原頸部皮下注射1.0ml/只，進行強化免疫；間隔2周后用滅活油乳劑抗原再次強化免疫一次，頸部皮下注射2.0ml/只；以后間隔8周進行一次強化免疫，每次頸部皮下注射2.0ml/只； (d)從第二次強化免疫后第7天開始，每隔三天抽樣用瓊脂擴散方法測定高免蛋黃中抗小鵝瘟特異抗體效價；蛋黃與生理鹽水按1∶3(V/V)稀釋后，加與蛋黃等體積三氯甲烷進行萃提，用瓊擴方法檢測萃提上清液中抗小鵝瘟特異抗體效價，若上清液瓊擴抗體效價達到1∶64以上即可集蛋，用于制備小鵝瘟蛋黃抗體； (e)將蛋殼消毒，打蛋并充分除去蛋清、胚盤和系帶，收集蛋黃；于蛋黃中加入3倍體積的生理鹽水，充分攪拌均勻，然后在蛋黃液中加入與蛋黃等體積的三氯甲烷，充分振蕩混合均勻，室溫作用60分鐘，以3500-4000rpm離心30分鐘，收集上層清液備用； (f)在分離的上清液中加入終濃度為0.05％的甲醛溶液，充分攪拌混勻，37℃保溫密封8-12小時；用0.22μm微孔濾膜過濾除菌，即得瓊擴抗體效價達到1∶32及以上異源抗小鵝瘟蛋黃抗體。 |
| 摘要 | 本發(fā)明為一種用于雛鵝小鵝瘟疾病的預防和治療的蛋黃抗體的制備方法。它改變了使用母鵝進行高免用于制備抗小鵝瘟蛋黃抗體的先例，而改用鴨和雞用于抗小鵝瘟蛋黃抗體的制備，包括小鵝瘟種毒的制取，高免抗原的制取，蛋黃抗體的制取。經臨床試驗和使用結果表明：用本方法制備的異源小鵝瘟蛋黃抗體用于預防和治療雛鵝小鵝瘟疾病，預防率和治愈率高、藥效期長，藥物效果顯著，其預防率為95％以上，早期治愈率達80％以上。用該方法制成的高免抗體，成本明顯低于同源的鵝蛋黃抗體和其它血清，且可預防由同源蛋黃抗體所致的垂直傳播疾病的影響。 |
| 國際公布 |
