公開(公告)號
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CN1306961C
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公開(公告)日
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2007.03.28
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申請(專利)號
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CN200510041858.3
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申請日期
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2005.03.19
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專利名稱
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四價輪狀病毒滅活疫苗的制備及應用
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主分類號
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A61K39/15(2006.01)I
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分類號
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A61K39/15(2006.01)I;A61P31/14(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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蘭州生物制品研究所
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發(fā)明(設計)人
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周 旭
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地址
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730046甘肅省蘭州市城關區(qū)鹽場路178號
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構(gòu)
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蘭州中科華西專利代理有限公司
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代理人
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王學定
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國省代碼
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甘肅;62
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主權(quán)項
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一種四價輪狀病毒滅活疫苗的制備方法,包括以下工藝步驟: ①細胞的制備:將小牛腎細胞或Vero細胞用胰酶消化分散,加入D-MEM完全培養(yǎng)液在37℃培養(yǎng)至細胞成片,再用無血清D-MEM培養(yǎng)液清洗細胞,用于接種輪狀病毒; ②病毒接種和培養(yǎng):將G1型、G2型、G3型、G4型輪狀病毒毒種加入10~15ug/ml胰酶,于37℃消化45分鐘,以感染復數(shù)為5~10將G1型、G2型、G3型、G4型輪狀病毒分別接種到步驟①制備的細胞,并在36.5-37.5℃吸附40~60分鐘后吸棄病毒液,再用含1~1.5ug/ml胰酶的無血清D-MEM培養(yǎng)液于33~35℃培養(yǎng)至細胞出現(xiàn)明顯病變時終止; ③病毒收集、濃縮和純化:將上述接種的各病變細胞凍融,高速離心后收集上清液得各病毒原液;通過超濾濃縮上述病毒原液,并以蔗糖密度梯度離心或柱層析純化病毒后即為各單價病毒原液; ④病毒滅活:采用0.05%福爾馬林或1∶4000β-丙內(nèi)酯滅活上述各單價病毒,除菌過濾后即為單價疫苗原液; ⑤混合上述各單價疫苗原液; ⑥成品的配制:將經(jīng)混合的單價疫苗原液加入適量的氫氧化鋁,即為成品。
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摘要
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本發(fā)明涉及一種四價輪狀病毒滅活疫苗的制備方法,該方法將胰酶消化分散的小牛腎細胞或Vero細胞培養(yǎng)成片后以不同的感染復數(shù)分別接種G1、G2、G3、G4型輪狀病毒,用無血清D-MEM培養(yǎng)液至細胞出現(xiàn)明顯病變后收獲病毒液并經(jīng)濃縮、純化、滅活、混合后加入適量的氫氧化鋁制備而成。本發(fā)明制備的四價輪狀病毒滅活疫苗經(jīng)動物實驗證明具有良好的免疫原性;經(jīng)無菌試驗、病毒滴定、滅活試驗、總蛋白含量、硫柳汞含量、氫氧化鋁含量、效力測定、熱穩(wěn)定性試驗、異常毒性檢查、細菌內(nèi)毒素檢查等檢定完全合格,主要用于預防嬰幼兒輪狀病毒感染性疾病。
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國際公布
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