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主權項
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一種中藥決明子蛋白質的提取方法，其特征在于包括如下步驟： (1)決明子粗蛋白的提取，包括： ——在4-8℃條件下，將決明子碾碎后用石油醚或環(huán)己烷浸泡脫脂24-48小時，分2-4次進行； ——回收溶劑，殘渣按1g：10ml-1g：50ml的體積浸泡于50mmol pH為8.0的KH2PO4-NaOH中8-12小時，重復3-5次，合并提取液； ——提取液離心20-30min，取上清液；上清液邊攪拌邊加入硫酸銨至45％-55％的飽和度，離心分離，保留沉淀；沉淀物在分子量3,000-8,000的透析袋中進行脫鹽； ——冷凍干燥儀中-20℃至-80℃溫度下進行冷凍干燥，得到粉末狀決明子粗蛋白，-20℃冷藏備用： (2)決明子粗蛋白的提純，包括： ——將上述方法得到的粉末狀決明子粗蛋白充分溶解于15mmol-25mmol pH為7.0-8.0的Tris-HCl的緩沖液中； ——用分子篩層析柱進行初步純化，分子篩層析柱上樣前先用含有0.15-0.3mol NaCl的上述緩沖液平衡2-5倍柱體積；每次上樣量為180μl-240μl，監(jiān)測波長為280nm，流速為0.3-0.7ml/min；決明子粗蛋白經(jīng)分子篩層析被分成5個峰：分別為peak1、peak2、peak3、peak4和peak5； (3)決明子蛋白質peak2的分離純化，包括：用離子交換柱純化peak2，離子交換柱按照A液與B液依次交替的程序平衡，A液為15mmol-25mmol pH為7.0-8.0的Tris-HCl，B液為含有1.0mol NaCl的A液；將peak2濃縮、脫鹽，上樣量為25mg-50mg/ml；柱子用0-1.0mol的NaCl梯度、15mmol-25mmol pH為7.0-8.0的Tris-HCl的緩沖液進行洗脫，流速為0.8-1.5ml/min；peak2經(jīng)離子交換柱層析被分成3個峰，分別為：peak I、peak II和peak III，收集peakIII。
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