方法名稱(chēng):
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方法名稱(chēng): |
復(fù)方草珊瑚含片—反丁烯二酸的測(cè)定—高效液相色譜法 |
應(yīng)用范圍: |
本方法采用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方草珊瑚含片中反丁烯二酸的含量。 本方法適用于復(fù)方草珊瑚含片。 |
方法原理: |
供試品研細(xì),置容量瓶中, 加HPLC分析流動(dòng)相進(jìn)行超聲提取,放冷,加流動(dòng)相定容,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離,用紫外吸收檢測(cè)器,于波長(zhǎng)210nm處檢測(cè)反丁烯二酸的吸收值,計(jì)算出其含量。 |
試劑: |
1. 乙腈(色譜純) 2. 磷酸二氫鉀 3. 磷酸 |
儀器設(shè)備: |
1. 儀器 1.1 高效液相色譜儀 1.2 色譜柱 為Pinnale Amino色譜柱(5μm, 250×4.6mm)。 1.3 紫外吸收檢測(cè)器 2. 色譜條件 2.1 流動(dòng)相:0.4%磷酸二氫鉀溶液(以磷酸調(diào)pH值為2.5~3.0)。 2.2 檢測(cè)波長(zhǎng):210nm 2.3柱溫:室溫 |
試樣制備: |
1. 稱(chēng)取供試品 取本品10片, 研細(xì)(過(guò)5號(hào)篩,80目), 精密稱(chēng)取2.0g。 2. 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取反丁烯二酸對(duì)照品0.1g,置100mL量瓶中,加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度,搖勻勻,作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。 3. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0,2.0,5.0,10.0,15.0,25.0mL, 分別置100mL量瓶中,加流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,作為繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。 4.供試品溶液的制備 將供試品置100mL量瓶中,加90mL流動(dòng)相溶液,超聲處理1h,放冷,加流動(dòng)相溶液定容,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液為供試品溶液。 注:“精密稱(chēng)取”系指稱(chēng)取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。 |
操作步驟: |
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制 精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液20μL注入高效液相色譜儀,用紫外吸收檢測(cè)器,于波長(zhǎng)210nm處測(cè)定反丁烯二酸的吸收值,以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度對(duì)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),進(jìn)行線(xiàn)性回歸,得到回歸方程。 2. 供試品的測(cè)定 精密吸取供試品溶液20μL注入高效液相色譜儀,用紫外吸收檢測(cè)器,于波長(zhǎng)210nm處測(cè)定反丁烯二酸的吸收值,計(jì)算出其含量。 |
參考文獻(xiàn): |
周?chē)?guó)平, 劉洪宇, 王漢章等. 復(fù)方草珊瑚含片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究, 中成藥, 1999, 21(10): 507-509。 |