復(fù)方草珊瑚含片—反丁烯二酸的測(cè)定—高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方草珊瑚含片中反丁烯二酸的含量。

本方法適用于復(fù)方草珊瑚含片。

供試品研細(xì)，置容量瓶中, 加HPLC分析流動(dòng)相進(jìn)行超聲提取，放冷，加流動(dòng)相定容，搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)210nm處檢測(cè)反丁烯二酸的吸收值，計(jì)算出其含量。

1. 乙腈（色譜純)

2. 磷酸二氫鉀

3. 磷酸

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

為Pinnale Amino色譜柱（5μm, 250×4.6mm)。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：0.4%磷酸二氫鉀溶液(以磷酸調(diào)pH值為2.5~3.0)。

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm

2.3柱溫：室溫

1. 稱(chēng)取供試品

取本品10片, 研細(xì)（過(guò)5號(hào)篩，80目), 精密稱(chēng)取2.0g。

2. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取反丁烯二酸對(duì)照品0.1g，置100mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

3. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0，2.0，5.0，10.0，15.0，25.0mL, 分別置100mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4.供試品溶液的制備

將供試品置100mL量瓶中，加90mL流動(dòng)相溶液，超聲處理1h，放冷，加流動(dòng)相溶液定容，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液為供試品溶液。

注：“精密稱(chēng)取”系指稱(chēng)取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制

精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液20μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)210nm處測(cè)定反丁烯二酸的吸收值，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度對(duì)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得到回歸方程。

2. 供試品的測(cè)定

精密吸取供試品溶液20μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)210nm處測(cè)定反丁烯二酸的吸收值，計(jì)算出其含量。

周?chē)?guó)平, 劉洪宇, 王漢章等. 復(fù)方草珊瑚含片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究, 中成藥, 1999, 21(10): 507-509。