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1.2.3 PCR擴(kuò)增及其產(chǎn)物檢測
參照Kupari等〔1〕使用的引物，上游序列5′CAG GAG GAG ACC CCA TGT GAC3′，下游序列5′CCT CCA CCC TGT TCA GCCC3′。PCR反應(yīng)體系：10×PCR緩沖液(加Mg2+)2.5 μl,引物各1 μl,10 mmol/L dNTP 1 μl,1 U Taq酶,DNA模板1 μl，加滅菌去離子水至總體積25 μl。PCR擴(kuò)增條件：94℃預(yù)變性5 min，繼35個循環(huán)進(jìn)行擴(kuò)增(94℃變性1 min，68℃退火1 min，72℃延伸1 min)，最后72℃延伸5 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。
1.2.4 DNA多態(tài)性分析
限制性酶切反應(yīng)體系： PCR產(chǎn)物10 μl，HaeⅢ內(nèi)切酶10 U，10倍緩沖液2 μl，加滅菌去離子水至20 μl。酶切條件37℃ 2～3 h，酶切產(chǎn)物經(jīng)2.0%瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察電泳帶并照相。
1.3 統(tǒng)計學(xué)處理
應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料采用x±s表示。基因型和等位基因頻率用基因計數(shù)法，等位基因頻率比較及檢驗基因型頻率與HardyWeinberg平衡定律符合程度，均用χ2檢驗。組別間比較采用t檢驗或χ2檢驗。
2 結(jié)果
2.1 兩組CYP11B2基因
344C/T多態(tài)性頻率分布特點 PCR產(chǎn)物長537 bp。CYP11B2基因344位點可發(fā)生胸腺嘧啶(T)與胞嘧啶(C)的互換,即T344C。344C等位基因有HaeⅢ酶切位點，而344T等位基因無該酶切位點，所以，TT型酶切片段為273 bp,CC型為202 bp，CT型酶切后產(chǎn)生273和202 bp片段，各基因型均含有多個小片段。見圖1。結(jié)果表明，武漢地區(qū)漢族老年人CYP11B2基因344C/T多態(tài)性以TT和CT基因型占優(yōu)勢，經(jīng)HardyWeinberg遺傳定律檢驗，達(dá)到遺傳平衡，具有群體代表性(χ2=0.003，P>0.05)。
2.2 兩組CYP11B2基因
344C/T多態(tài)性分析 由于CC基因型在研究對象中頻率較低，為了便于進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，故在本研究中將攜帶C等位基因的基因型合并后進(jìn)行分析(即CC+CT基因型與TT基因型進(jìn)行比較)。結(jié)果顯示：在病例分組的EH組中，CC+CT基因型分布頻率明顯高于對照組(χ2=4.52，P<0.05)。見表2。表2 兩組CYP11B2基因各基因型及等位基因頻率的比較(略)
3 討 論
CYP11B2是體內(nèi)生物合成醛固酮過程中最后一步生化反應(yīng)的催化酶，屬于線粒體細(xì)胞色素P450酶超家族〔2〕。CYP11B2基因定位于8號染色體上(8q22)，總長約7 kb，含8個內(nèi)含子和9個外顯子〔3〕。該基因有兩種常見變異：CYP11B2基因的第2個內(nèi)含子中大部分堿基可被CYP11B1基因的相應(yīng)部分取代;另一種變異位于啟動子區(qū)域344處，該處是類固醇轉(zhuǎn)錄因子(steroidogenic factor1，SF1)的結(jié)合位點，該位點可發(fā)生C與T交換。醛固酮作為體內(nèi)重要的鹽皮質(zhì)激素，在高血壓的形成和發(fā)展過程中具有重要作用醫(yī).學(xué)全.在.線quanxiangyun.cn。
本研究發(fā)現(xiàn)，武漢地區(qū)老年漢族人群CYP11B2基因344C/T多態(tài)性以TT和CT基因型占優(yōu)勢，C和T等位基因頻率分別為0.25和0.75，與早先報道的一個沒有年齡限制的樣本研究結(jié)果一致〔4〕。但與國外報道結(jié)果存在明顯差異〔1，5〕。種族差異可導(dǎo)致CYP11B2基因344C/T多態(tài)性頻率分布的不同。
國外有關(guān)CYP11B2基因344C/T多態(tài)性與EH關(guān)系的研究結(jié)果不盡相同。
