實(shí)習(xí)十六 血紅蛋白測(cè)定
一、目的要求
(一)掌握血紅蛋白測(cè)定的方法。
(二)熟記其正常值及其臨床意義。
二、見(jiàn)習(xí)方法
(—)輔導(dǎo)教師講解操作方法及示范。
(二)學(xué)生分組練習(xí)。
三、見(jiàn)習(xí)用具：
白工作衣自備。
血紅蛋白吸管、光度計(jì)、紅細(xì)胞計(jì)算盤(pán)、蓋玻片、稀釋液、試管等由實(shí)驗(yàn)至準(zhǔn)備。
四、見(jiàn)習(xí)內(nèi)容
(一)吸血練習(xí)：
1、取抗凝血一大滴，置于玻片上。
2、用右手拇指及中指握持血紅蛋白吸管帶氣囊端，練習(xí)以食指頭靈活控制氣囊。
3、吸血恰到所需之刻度處。如稍多少許，可用干棉球回吸調(diào)準(zhǔn)，再將血液吹出。注意避免混入氣泡。如用力過(guò)大，血液吸至氣囊內(nèi)，要重新洗滌吸管再行吸血。
4、吸管洗滌：以生理鹽水洗滌吸洗數(shù)次，用后棉花球堵住吸管嘴反復(fù)按氣囊吹干數(shù)次，即可繼續(xù)使用。
5、以上步驟反練習(xí)至熟練掌握。
(二)血紅蛋白測(cè)定
紅蛋白 (Hemoglobin，簡(jiǎn)稱(chēng)Hb)測(cè)定
一、氰化高鐵血紅蛋白(HicN法)
原理
全血加HicN試劑，除Hbs外其它血紅蛋白衍生物均能轉(zhuǎn)化成穩(wěn)定的棕紅色氰化高鐵血紅蛋白。在分光光度計(jì)540nm處比色測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)讀數(shù)和標(biāo)本讀數(shù)計(jì)算其濃度。
試劑
HicN標(biāo)準(zhǔn)液：(齊文氏) 商品試劑
操作
1、取血20μl加到5ml HicN試醫(yī)學(xué)全在線劑中，充分混和，靜置5分鐘。
2、分光光度計(jì)(帶寬應(yīng)小于8nm)，波長(zhǎng)540nm處，光戲(比色杯內(nèi)徑1.000cm，以HicN試劑或蒸餾水液為空白，測(cè)定吸光度(A)。
計(jì)算
血紅蛋白(g/L)=測(cè)定管吸光度××251
=測(cè)定管吸光度×367.7
式中：
①64458是目前國(guó)際公認(rèn)的血紅蛋白平均分子量。
②44000是1965年國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)公布的血紅蛋白摩爾吸光度。
③251是稀釋倍數(shù)。
由于儀器的差異，性能不一，仍以采用HicN參考標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法為妥，以血紅蛋白參考值quanxiangyun.cn/yishi/為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制曲線，實(shí)際應(yīng)用比較方便。
注意事項(xiàng)
1、血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中，KCN為劇毒藥品。
2、下列因素可引起血紅蛋白假性增高：脂血癥、血液濃縮、白細(xì)胞>30000/μl。重癥黃疸、嚴(yán)重的血管內(nèi)溶血等。
