南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)教學(xué)教案
課程名稱(chēng)病理學(xué) 授課章節(jié) 免疫組織化學(xué)
授課對(duì)象本 科 授課學(xué)時(shí) 4學(xué)時(shí)
授課方式實(shí)驗(yàn)課 教材或講義 病理學(xué)（第七版)
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求
1、掌握免疫組化的技術(shù)方法。
2、掌握免疫組化檢測(cè)的意義。
二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、HBsAg
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)主要用于肝炎、肝硬化和肝癌的研究。
細(xì)胞定位：胞漿
鏡下觀(guān)察：在部分肝細(xì)胞胞漿內(nèi)見(jiàn)棕黃色顆粒，HBsAg陽(yáng)性，說(shuō)明肝細(xì)胞內(nèi)有乙型肝炎病毒感染。
病毒性肝炎(HBsAg) 20× 病毒性肝炎(HBsAg) 40×
2、HBcAg
乙型肝炎核心抗原(HBcAg)主要用于肝炎、肝硬化和肝癌的研究。
細(xì)胞定位：核為主/核周胞漿
鏡下觀(guān)察：在部分肝細(xì)胞核和核周胞漿內(nèi)見(jiàn)棕黃色顆粒，HBcAg陽(yáng)性，說(shuō)明肝細(xì)胞內(nèi)有乙型肝炎病毒感染。
病毒性肝炎(HBcAg) 20× 病毒性肝炎(HBcAg) 40×
3、細(xì)胞角蛋白Cytokeratin CK
CK主要標(biāo)記角化上皮、復(fù)層鱗狀上皮、復(fù)層上皮、增生的角化細(xì)胞和單層上皮，用于鱗癌，各種腺癌，移行細(xì)胞癌陽(yáng)性標(biāo)記。在鑒別診斷中可聯(lián)合EMA和CEA等指標(biāo)進(jìn)行上皮性腫瘤與非上皮性腫瘤的鑒別診斷，也可以用于各種癌的研究。
細(xì)胞定位：胞漿
鏡下觀(guān)察：在鱗癌癌細(xì)胞胞漿內(nèi)見(jiàn)棕黃色顆粒，CK陽(yáng)性。
鱗狀細(xì)胞癌(CK) 20×鱗狀細(xì)胞癌(CK) 40×
4、上皮膜抗原Epithelial Membrane Antigen (EMA)
EMA是一組糖蛋白，廣泛分布在各種正常上皮細(xì)胞膜上及其上皮源性腫瘤細(xì)胞中，分布范圍與細(xì)胞角蛋白相似，但對(duì)內(nèi)臟腺上皮的表達(dá)優(yōu)于細(xì)胞角蛋白。因此對(duì)上皮源性腫瘤，尤其是低分化腺癌，最好與細(xì)胞角蛋白聯(lián)合應(yīng)用，可提高陽(yáng)性率。
細(xì)胞定位：胞漿
鏡下觀(guān)察：在鱗癌癌細(xì)胞胞漿內(nèi)見(jiàn)棕黃色顆粒，EMA陽(yáng)性。
鱗狀細(xì)胞癌(EMA) 20×鱗狀細(xì)胞癌(EMA) 40×
5、白細(xì)胞共同抗原（LCA、CD45)
LCA是造血細(xì)胞的特異性標(biāo)記，主要分布在T、B細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞和前體細(xì)胞表面，一般不存在于非造血組織中。因此是區(qū)別淋巴瘤，白血病和非造血組織腫瘤的一個(gè)良好標(biāo)記物。
細(xì)胞定位：胞漿。
鏡下觀(guān)察：可見(jiàn)淋巴結(jié)正常組織結(jié)構(gòu)，在淋巴細(xì)胞（包括T、B細(xì)胞)、單核細(xì)胞胞漿內(nèi)見(jiàn)棕黃色顆粒，LCwww.med126.comA陽(yáng)性。
正常淋巴結(jié)(LCA、CD45) 20× 正常淋巴結(jié)(LCA、CD45) 40×
6、CD20 B細(xì)胞
CD醫(yī).學(xué)全在線(xiàn)20主要分布在B細(xì)胞、前B細(xì)胞后期和漿細(xì)胞之前的B細(xì)胞，一般不與T細(xì)胞呈交叉反應(yīng)。對(duì)B細(xì)胞淋巴瘤和急慢性淋巴細(xì)胞白血病等有較好的細(xì)胞特異性，因此在惡性淋巴瘤尤其是T或B細(xì)胞淋巴瘤的分類(lèi)上，CD20是最常用的B細(xì)胞標(biāo)記。
細(xì)胞定位：胞膜
鏡下觀(guān)察：可見(jiàn)淋巴結(jié)正常組織結(jié)構(gòu)，在淋巴濾泡生發(fā)中心，B細(xì)胞胞膜呈棕黃色，CD20陽(yáng)性。
正常淋巴結(jié)(CD20 B細(xì)胞) 20× 正常淋巴結(jié)(CD20B細(xì)胞)40×
7、CD3 T細(xì)胞
CD3對(duì)早期T細(xì)胞有較高的特異性，對(duì)B細(xì)胞不表達(dá)，主要用于T細(xì)胞淋巴瘤的診斷。其特異性較高但敏感性偏低，因此在臨床應(yīng)用上與CD45RO聯(lián)合檢測(cè)，以提高其診斷準(zhǔn)確率。
細(xì)胞定位：胞膜
鏡下觀(guān)察：可見(jiàn)淋巴結(jié)正常組織結(jié)構(gòu)，在副皮質(zhì)區(qū)，T細(xì)胞胞膜呈棕黃色，CD3陽(yáng)性。
正常淋巴結(jié)(CD3T細(xì)胞) 20× 正常淋巴結(jié)(CD3 T細(xì)胞) 40×
8、肌動(dòng)蛋白Actin
肌動(dòng)蛋白是一種具有收縮能力的微絲蛋白，廣泛分布于幾乎所有的肌型細(xì)胞中。主要用于檢測(cè)骨骼肌、平滑肌、血管平滑肌、心肌和肌源性腫瘤包括平滑肌瘤，平滑肌肉瘤和橫紋肌肉瘤以及肌上皮細(xì)胞和肌上皮瘤等。
細(xì)胞定位：胞漿
鏡下觀(guān)察：在闌尾壁肌層及血管壁平滑肌細(xì)胞胞漿內(nèi)見(jiàn)棕黃色顆粒，Actin陽(yáng)性。
闌尾炎(Actin) 20×闌尾炎(Actin) 40×
9、乳頭狀瘤病毒PapillomaVirus (PV)
該抗體是與乳頭狀瘤病毒衣殼蛋白L1蛋白反應(yīng)獲得的蛋白，在正常組織上皮或腫瘤性上皮乳頭狀瘤病毒感染的組織與細(xì)胞中有反應(yīng)，主要用于人類(lèi)生殖系統(tǒng)傳染性疾病及其腫瘤如宮頸癌的研究，亦可用于食管癌、乳腺癌等惡性腫瘤的研究。
細(xì)胞定位：胞核/核周
鏡下觀(guān)察：在部分鱗狀上皮細(xì)胞胞核/核周見(jiàn)棕黃色顆粒，PV陽(yáng)性。
三、時(shí)間安排（課時(shí)4×45’＝180’’)
1、免疫組織化學(xué)檢測(cè)原理、方法介紹 30分鐘
2、免疫組織化學(xué)檢測(cè)具體操作 140分鐘
3、小結(jié)提問(wèn) 10分鐘
四、重點(diǎn)
免疫組織化學(xué)檢測(cè)具體操作過(guò)程
五、難點(diǎn)
掌握好每一步的時(shí)間及試劑的用量等。
六、主要儀器設(shè)備
配套的免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑、工具等
七、復(fù)習(xí)思考題
本實(shí)驗(yàn)中各種蛋白檢測(cè)的意義。
