β-半乳糖苷酶試驗

1．原理

某些細菌具有β半乳糖苷酶，該酶可分解鄰-硝基苯-β-D-半乳糖苷（ONPG)，生成黃色的鄰-硝基酚。

2．方法

用接種環(huán)在三糖鐵培養(yǎng)基上刮取一環(huán)18小時菌齡的菌苔，加于無菌鹽水0.25 ml中制成濃厚的菌懸液，加入甲苯1滴，充分振搖，將試管置于37℃水浴中5分鐘，加入ONPG溶液0.25 ml，在37℃水浴中保溫，于20分鐘、4小時、18小時和24小時觀察結

果。

3．結果

出現(xiàn)黃色為陽性反應，不變色為陰性反應。通常在20～30分鐘內顯色。

4．意義

此試驗是測定不發(fā)酵或遲發(fā)酵乳糖的細菌是否產生半乳糖苷酶。由于細菌分解乳糖要有兩種酶，一是半乳糖昔滲透酶，另一是半乳糖苷酶。當缺乏滲透酶時，乳糖不能進入細胞，乳糖分解就不能進行。這兩種酶都是在乳糖存在的條件下誘導細菌產生。迅速及遲緩分解乳糖的細菌ONPG為陽性，如埃希菌屬、枸櫞酸桿菌屬。不發(fā)酵乳糖的細菌為陰性，如沙門菌屬、變形桿菌屬�？捎帽驹囼炞鳛檫t緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定方法。

5．試劑

（1)緩沖液：稱磷酸二氫鈉（NaH₂PO₄)6.9 g，溶于水45 ml中，用30％氫氧化鈉調整pH值為7.0，再加水至50ml，保存在4℃冰箱備用。用前若有結晶可加溫溶解。

（2)ONPG溶液：用ONPG 80 mg溶于水15ml中，再加入緩沖液5 ml，即成0.75 mol／L ONPG溶液。保存在4℃冰箱中，該溶液應為無色，若出現(xiàn)黃色，應棄之不用。