（四)肝內(nèi)膽管細胞癌及癌周肝組織內(nèi)HBV抗原的分布
在原發(fā)性肝癌中，最常見的是肝細胞肝癌，而肝內(nèi)膽管細胞癌比較少見，在我國大約為10%。長期以來，人們對肝內(nèi)膽管細胞癌的病因及發(fā)病機理研究甚少，認識不清。早年候?qū)氳霸鴪蟮�，膽�?nèi)提管細胞癌的發(fā)生與中華分枝睪吸蟲感染有關(guān)。最近有文獻報道，在肝內(nèi)膽管細胞癌及其癌周肝組織內(nèi)檢測出HBv 5中抗原（HBsAg、pre-S1、pre-S2、HBxAg和HBcAg)，而且檢出的陽性率很高。王文亮等報道（1993)，在20例肝內(nèi)膽管細胞癌中，HBxAg陽性檢出率為75%，pre-S1和S2各為40%，HBsAg為10%；在19例癌周肝組織中，HBxAg陽性檢出率為84%，pre-S1和S2各為47%，HBsAg t HbcAg分別為32%。在20例肝內(nèi)膽管細胞癌的病例中有17例（85%)有不同HBV抗原的表達，其中HBxAg陽性檢出率為80%。這一結(jié)果表明，肝內(nèi)膽管細胞癌的發(fā)生與HBV感染有密切關(guān)系。HBV5種抗原在肝內(nèi)膽管細胞癌及其癌周肝組織內(nèi)的陽性反應(yīng)及陽性細胞分布狀態(tài)與肝細胞肝癌相同。肝內(nèi)膽管細胞癌的發(fā)病過程可能與肝細胞肝癌不完全相同。肝細胞肝癌80%伴有肝硬變，特別是大結(jié)節(jié) 型肝硬變。一般認為大多數(shù)肝細胞肝癌是由于HBV感染→慢性肝炎→肝硬變→肝癌。而肝內(nèi)膽管細胞癌很少伴有肝硬變，它的發(fā)生過程主要不是通過肝硬變這一重要環(huán)節(jié) ，而是由慢性肝炎，肝細胞不典型增生或中間型細胞演變?yōu)楦伟�。HBV是否有直接致癌的作用尚有等進一步研究。
（五)肝細胞癌中的HBV的分子生物學
近10年來，國內(nèi)外對原發(fā)性肝細胞癌中乙型肝炎病毒DNA的存在，分布及意義進行了廣泛的研究，并取得了可喜的成果。用southern blot 分子雜交技術(shù)及原位分子雜交技術(shù)，在肝癌患者血清中和肝癌組織中檢測HBV-DNA的分布狀態(tài)。用HBV-DHA基因或其亞基因標記同位素（32P、35S等)及生物素地高辛等作為探針和肝癌及癌旁肝組織中的DNA進行雜交，通過放射自顯影法檢測HBV-DNA存在狀態(tài)（是整合或游離)；原位分子雜交經(jīng)過染色反應(yīng)觀察細胞內(nèi)HBV-DNA的定位和分布狀態(tài)。有人用southern blot方法檢測肝癌病人血清中HBV-DNA的情況，只有少數(shù)病例血清中有微量的HBV-DNA，則慢性乙型肝炎患者血清卻多為陽性，提示在HBsAg陽性肝癌病人血清中很少或沒有可測出的HBV-DNA。目前，國內(nèi)外已有不少文獻報道，在肝癌組織中有整合的HBV-DNA。例如，Shafritz等（1981)檢測了20例來自南非的肝癌患者，有15例HBV-DNA整合人宿主細胞DNA中，其中12例HBsAg陽性，3例HBsAg陰性而抗-HBs陽性。Tiollais（1981)檢查了15例來自歐洲的肝癌標本，HBsAg或抗-HBs陽性病例，檢查結(jié)果HBV-DNA均以整合形式存在。他們還觀察了32例HBsAg陽性的肝癌病人，結(jié)果證明在所有肝癌組織中均有HBV-DNA。國內(nèi)大多數(shù)報道在肝癌組織中HBV-DNA檢出率為60%～80%。上述結(jié)果表明，人原發(fā)性肝細胞癌的發(fā)生和HBV感染有極為密切關(guān)系。
�。�)肝癌發(fā)生中HBV分子遺傳學及免疫機理
免疫病理學及分子生物學的研究表明，HBV不僅有間接致肝癌作用，而且還可能有直接致癌作用。HBV致癌作用的分子機理目前集中對于HBV的分子遺傳學和分子免疫學的研究。在原發(fā)性肝細胞癌發(fā)生中，HBV致癌作用可能有兩個模式：一是病毒的癌基因模式，就是表達病毒的癌基因（HBV-DNA)；另一個是細胞癌基因模式，在肝細胞癌變過程中，細胞癌基因可能發(fā)生啟動子插入，染色體異常（缺失、重復、易位)及點突變等。研究證明，機體感染HBV后，HBV將其本身的基因摻入到肝細胞核內(nèi)，和宿主細胞基因發(fā)生整合，從而使正常的肝細胞轉(zhuǎn)變?yōu)榘┘毎＿@需要經(jīng)過一個復雜的演變過程。在肝癌的HBV-DNA整合部位，常發(fā)生染色體缺失、重復或易位。Slagle等（1990)研究發(fā)現(xiàn)，有44%的肝細胞癌病人發(fā)生染色體的丟失，而17P的丟失常包括抑癌基因P53的丟失，這可能是肝細胞癌發(fā)生的原因。Blum（1985)認為在HBV-DNA整合位點附近宿主細胞基因有重排現(xiàn)象。Tiollais等認為病毒DNA整合人宿主細胞DNA或與DNA發(fā)生重排，產(chǎn)生HBV激活的基因或激活細胞的原癌基因，進而導致細胞的轉(zhuǎn)化，最終發(fā)生肝癌。有人通過實驗研究證明病毒插入到細胞原癌基因附近，作為一種誘變劑，可能直接參與肝細胞癌的發(fā)生。Seifter等（1990)在體外進行X基因的轉(zhuǎn)化實驗，將HBV-DNA或X基因序列連在SV40早期啟動子的加強子上，用以轉(zhuǎn)化傳代鼠肝細胞及傳代鼠纖維母細胞，轉(zhuǎn)染成功的能穩(wěn)定復制HBV的肝細胞表現(xiàn)出惡性生長的特征，將其接種裸鼠，顯示出致癌性，并激活細胞原癌基因c-fos過量表達。這提示，HBV-DNA含有致癌基因序列，可以促進細胞向惡性轉(zhuǎn)化。HBV基因組中編碼加強子和X蛋白的堿基序列也有某些致癌活性。盡管如此，到目前為止，HBV致癌的分子機理尚不完全清楚，有待進一步研究。
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