比色分析測量儀器和測量方法(比色分析,吸光光度法,比色測量儀器)

　�。ǘ�）比色測量儀器

　　1．光電比色計(jì)

　　光電比色計(jì)用光電池和檢流計(jì)測量透射光的強(qiáng)度并直接可讀出百分透光率T（%）或吸光度A。圖8-9是581-G型光電比色計(jì)的示意圖。它是利用濾光片把鎢燈產(chǎn)生的白光中與測定無關(guān)的光除去，使入射光盡可能是接近溶液補(bǔ)色的單色光，從而提高了比色分析的準(zhǔn)確度。

圖8－9　 581-G型光電比色計(jì)光學(xué)線路示意圖

圖8-10　721型分光光度計(jì)光學(xué)系統(tǒng)示意圖１.光源　２.,8.聚

光透鏡�。�.棱鏡�。�.準(zhǔn)直鏡5.,11.保護(hù)玻璃 6.入射狹縫 7.

平面鏡 9.吸收池10.光門 12.光電管 13.光柵

　　2．721型分光光度計(jì)

　　721型分光光度計(jì)的工作波長范圍為360-800nm。采用真空光電管作為光電能量轉(zhuǎn)換元件，在整個可見光區(qū)都比較靈敏。同時(shí)采用晶體管放大電路和電表直讀結(jié)構(gòu)，儀器的靈敏度和穩(wěn)定性都比較好。

　　圖8-10為721型分光光度計(jì)的光學(xué)系統(tǒng)示意圖。由光源發(fā)出的連續(xù)輻射于聚光鏡上，經(jīng)平面鏡轉(zhuǎn)角90度反射到入射狹縫，射入單色器。入射光經(jīng)過準(zhǔn)直鏡反身射在出射狹縫上，再經(jīng)過聚光透鏡后進(jìn)入比色皿。經(jīng)溶液吸收后的透射光通過光門照射在光電管上轉(zhuǎn)換為光電流信號，經(jīng)過入大后輸入檢流計(jì)，由電表直接顯示吸光度。

　　二、比色分析的測量方法

　　無論是光電比色計(jì)還是分光光度計(jì)，最常用的測量方法有如下兩種。

　�。ㄒ唬�標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)

　　先配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用選定的顯色劑顯色。選用合適波長的入射光（光電比色計(jì)用濾光片，分光光度計(jì)可轉(zhuǎn)動波長調(diào)節(jié)器）。測定時(shí)先以空白溶液調(diào)節(jié)透光率100%，然后分別測定標(biāo)準(zhǔn)系列的吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)作圖得到一條通過原點(diǎn)的直線，叫做標(biāo)準(zhǔn)曲線（或稱工作曲線）。

　　例如，測定維生素B12時(shí)，可預(yù)先繪制維生素B12的A-c標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖8-11），再用完全相同的方法和步驟測定被測溶液的吸光度，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出被測溶液的濃度或含量。

　　這種方法叫做標(biāo)準(zhǔn)蛐線法。標(biāo)準(zhǔn)曲線可在固定儀器和方法的條件下多次使用，適合于經(jīng)常性工作。但若儀器不同或測定方法及條件改變，測得的標(biāo)準(zhǔn)曲線不同。因此在更換任何測定條件時(shí)都需重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

圖8-11 維生素B₁₂的標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　（二）直接比較計(jì)算法

　　若僅對個別樣品進(jìn)行測定，且A-c曲線線性良好，可水作標(biāo)準(zhǔn)曲線而直接比較測定結(jié)果。

　　先配制一個被測物質(zhì)溶液濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液，與被測溶液在相同條件下測定吸光度。根據(jù)下式可以計(jì)算。

A_標(biāo)=K_標(biāo)c_標(biāo)b_標(biāo)

A_測=K_測c_測b_測

　　由于使用同一波長的入射光，采用同樣的比色皿，測定同樣的物質(zhì)。所以

K_標(biāo)=K_測

b_標(biāo)=b_測

　　因此A_標(biāo)/A_測=c_標(biāo)/c_測

　　則c_測=A_測/A_標(biāo)×c_標(biāo)

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